楊梅苷對(duì)NK-92細(xì)胞活性的調(diào)節(jié)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究楊梅苷（Myr）對(duì)NK-92細(xì)胞活性的調(diào)節(jié)作用及其作用機(jī)制。
　　方法：除正常組外，不同濃度楊梅苷（5、10、20μM）分別培養(yǎng)NK-92細(xì)胞，以脂多糖（LPS）作為陽(yáng)性對(duì)照藥。采用MTT法觀察不同濃度楊梅苷對(duì)NK-92細(xì)胞增殖的影響；以人慢性髓原白血病細(xì)胞（K-562）、人肝癌細(xì)胞（SMMC-7721）、肝星狀細(xì)胞（HSCs-T6）為靶細(xì)胞，考察楊梅苷對(duì)NK-92細(xì)胞殺傷活性的影響；ELISA試劑盒測(cè)定NK-92分泌細(xì)

2、胞因子γ干擾素（IFN-γ）、腫瘤壞死因子（TNF-α）含量的變化；采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)NK-92細(xì)胞殺傷分子穿孔素（PFP）、顆粒酶B（Gz-B）、Fas配體（Fas L）表達(dá)的變化；NK-92細(xì)胞表型CD56、CD16、CD25、CD69表達(dá)的變化；NK-92細(xì)胞表面活化受體NCR1、NCR2、NCR3表達(dá)的變化；Western blot檢測(cè)Syk/ZAP70酪氨酸激酶信號(hào)傳導(dǎo)通路中 Syk、ZAP70、p-Syk、p-ZAP70表達(dá)

3、的變化；MTT法觀察楊梅苷對(duì)環(huán)磷酰胺（CTX）和白細(xì)胞介素-15（IL-15）調(diào)節(jié) NK-92細(xì)胞增殖活性的影響。
　　結(jié)果：培養(yǎng)36、48h后，楊梅苷可明顯增強(qiáng)NK-92細(xì)胞的增殖活性（P<0.05）。在效靶比5:1、10:1下，中、高劑量組楊梅苷可顯著提高其對(duì)K-562、HSCs-T6細(xì)胞的殺傷活性（P<0.01），在效靶比15:1、10:1下，楊梅苷可顯著升高其對(duì)SMMC-7721細(xì)胞的殺傷活性（P<0.01）。楊梅苷也能提

4、高細(xì)胞因子IFN-γ、TNF-α的含量（P<0.01），且有一定的劑量依賴(lài)性。同時(shí)楊梅苷能增強(qiáng)殺傷分子PFP和Gz-B的表達(dá)（P<0.05），增強(qiáng)NK-92細(xì)胞表型CD56、CD25和活化受體NCR2的表達(dá)，上調(diào)Syk、ZAP70蛋白的磷酸化（P<0.01）。此外，CTX能抑制NK-92增殖而IL-15能促進(jìn)NK-92細(xì)胞增殖（P<0.01），楊梅苷均可顯著提高CTX抑制的NK-92細(xì)胞增殖活性，促進(jìn)IL-15活化的NK-92細(xì)胞增殖（