塞來昔布對(duì)SKBR3細(xì)胞增殖、凋亡及Nucleostemin表達(dá)的影響.pdf

1、近年來乳腺癌的發(fā)病率在世界范圍內(nèi)，尤其是在中國，一直呈增高的趨勢。20％～30％的乳腺癌患者中Her-2/neu 原癌基因存在高表達(dá)。有研究表明，過度表達(dá)COX-2的乳腺上皮細(xì)胞發(fā)生癌變概率明顯提高。隨著乳腺癌同COX-2的關(guān)系日益受到重視，COX-2 抑制劑聯(lián)合輔助治療乳腺癌已經(jīng)成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。
　　 Nucleostemin(NS)基因是2002年發(fā)現(xiàn)的一種新的p53 結(jié)合蛋白，在干細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中都有高表達(dá)，而在終末分

2、化細(xì)胞中不表達(dá)，是一個(gè)參與細(xì)胞增殖過程的重要蛋白。關(guān)于NS基因在維持腫瘤細(xì)胞增殖方面的具體機(jī)制一直不甚清楚，國內(nèi)外學(xué)者仍在研究當(dāng)中。
　　 本研究選取塞來昔布作為選擇性COX-2 抑制劑的代表藥物，體外培養(yǎng)人乳腺癌SKBr3細(xì)胞株（高表達(dá)Her-2/neu），應(yīng)用MTT（四甲基偶氮唑鹽）、細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察、免疫印跡、Caspase3 酶活性測定、流式細(xì)胞術(shù)等方法，觀察塞來昔布對(duì)SKBr3細(xì)胞增殖與凋亡的影響，并檢測NS基因在腫瘤細(xì)

3、胞中的定位與表達(dá)變化情況。結(jié)果表明：MTT代謝率測定結(jié)果顯示塞來昔布能顯著抑制SKBr3細(xì)胞的增殖，并且呈濃度依賴性,即隨著塞來昔布作用濃度的增加而抑制作用增強(qiáng)。與對(duì)照組相比，細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察到塞來昔布加藥組SKBr3細(xì)胞出現(xiàn)典型的凋亡細(xì)胞特征。免疫熒光與免疫印跡結(jié)果顯示NS 蛋白的表達(dá)水平隨著塞來昔布濃度的增加而逐漸增加，免疫印跡結(jié)果還顯示P53蛋白的表達(dá)水平隨著塞來昔布濃度的增加也逐漸增加，而COX-2 蛋白和CyclinD1 蛋白則