選擇性COX-2抑制劑塞來昔布對(duì)人淋巴瘤細(xì)胞株Raji增殖、凋亡及Survivin表達(dá)影響的研究.pdf

1、目的：惡性淋巴瘤是淋巴干細(xì)胞分化異?？寺⌒栽鲋车哪[瘤，為兒童期常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率有逐年增高之勢(shì)。目前傳統(tǒng)化療仍是其治療的主要手段，但耐藥是影響長(zhǎng)期生存的重要因素之一。因而，尋求一種更為有效的防治措施對(duì)改善患兒的預(yù)后和生活質(zhì)量具有十分重要的意義。非甾體類抗炎藥(nonsteroidal anti innammatory dmgs，NSAIDs)塞來昔布(Celecoxib)是環(huán)氧合酶(cyc100xygenase，COX)中COX

2、．2的選擇性抑制劑，已有研究表明其對(duì)多種腫瘤具有抑制作用。普遍認(rèn)為其抗腫瘤的作用機(jī)制通過兩條途徑：COX-2依賴性途徑和非COX-2依賴性途徑，但具體機(jī)制未完全闡明。Survivin是新近發(fā)現(xiàn)的抑制凋亡蛋白(inhibitibor ofapoptosis protein，LAP)家族中的成員之一，作為一種多腫瘤抑制基因，其在腫瘤細(xì)胞的凋亡過程中起調(diào)控作用。有研究證實(shí)Survivin能抑制某些化療藥物誘導(dǎo)的凋亡，這使其有望成為腫瘤治療的潛

3、在新靶點(diǎn)。目前有關(guān)Survivin表達(dá)與Celecoxib誘導(dǎo)淋巴瘤細(xì)胞凋亡關(guān)系的研究文獻(xiàn)報(bào)道罕見。本實(shí)驗(yàn)通過體外培養(yǎng)人Burk"s淋巴瘤Raii細(xì)胞，觀察選擇性COX-2抑制劑Celecoxib對(duì)Raii細(xì)胞增殖、凋亡及細(xì)胞周期分布的影響，并檢測(cè)Survivin在細(xì)胞中的表達(dá)情況，初步探討Celecoxib對(duì)惡性淋巴瘤的作用及其抗腫瘤的非COX-2依賴性途徑之可能機(jī)制，為Celecoxib的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。 方法：體外

4、培養(yǎng)人Burk''s淋巴瘤Raii細(xì)胞，用不同濃度的Celecoxib進(jìn)行干預(yù)。應(yīng)用MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況；流式細(xì)胞術(shù)(FCM)分析Celecoxib對(duì)細(xì)胞周期的影響并檢測(cè)細(xì)胞凋亡及Survivin蛋白在細(xì)胞中的表達(dá)情況；應(yīng)用RT-PCR法檢測(cè)細(xì)胞中SuⅣivin mRNA的表達(dá)水平。 結(jié)果： 1 MTT比色試驗(yàn)結(jié)果表明：Celecoxib各濃度組作用于Raji細(xì)胞24h后抑制率分別為9.44％，23.08％，5

5、5.53％，73.00％；48h后抑制率分別為29.10％，53.25％，71.86％，88.01％；72h后抑制率分別為37.88％，62.92％，78.57％，93.87％。各實(shí)驗(yàn)組作用于Raii細(xì)胞24、48、72h后吸光度值與對(duì)照組相比均有顯著性差異(P<0.05)，同時(shí)各濃度組之間以及時(shí)間組之間有顯著性差異(P<0.05)。 2 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示：Celecoxib各濃度組作用于Raii細(xì)胞48h后出現(xiàn)明顯的凋亡

6、峰，凋亡率分別為(9.20±0.19)％，(23.07±1.77)％，(35.66±1.05)％，(44.63±1.34)％；對(duì)照組未見凋亡峰或僅有低平的凋亡峰，其凋亡率為(2.23±0.91)％。用最小顯著差法兩兩比較，各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比均具有顯著差異(P<0.05)。經(jīng)單因素方差分析，各濃度組間Celecoxib對(duì)細(xì)胞凋亡率的影響有顯著差異(P<0.05)。 3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示：Celecoxib各濃度組作用于Ra

7、ii細(xì)胞48h后，Celecoxib各處理組GO/G1期細(xì)胞比例分別為(58.53±1.12)％， (64.97±0.60)％，(69.17±0.40)％，(73.83±0.35)％；S期細(xì)胞比例分別為(28.70±1.32)％，(23.87±O.59)％，(21.07±O.67)％，(17.17±O.49)％；G2/M期細(xì)胞比例分別為(12.77±O.21)％，(11.17±0.35)％，(9.77±0.35)％，(9.0±0.26)

8、％。對(duì)照組處于G0/G1期，S期，G2/M期細(xì)胞比例分別為(53.50±1.35)％，(32.80±1.61)％，(13.70±0.40)％。與對(duì)照組相比，Celecoxib各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞周期分布發(fā)生明顯變化(P<0.05)。經(jīng)單因素方差分析，各濃度組間Celecoxib對(duì)細(xì)胞周期的影響有顯著差異(P<0.05)。 4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示：12.5mol/L，50μml/L，10μmol/L，15μmol/L Celecoxi

9、b各處理組作用Raii細(xì)胞48h后Survivin蛋白表達(dá)定量分析F1分別為0.95±0.022，0.81±0.044，0.72±0.039，0.64±0.056。對(duì)照組的Survivin蛋白表達(dá)FI被看作為1，12.5μmol/L Celecoxib組與對(duì)照組間無顯著性差異(P>0.05)；而Celecoxib其余濃度組Survivin蛋白表達(dá)率與對(duì)照組相比，差異均具有顯著意義(P<0.05)。Celecoxib不同濃度組間下調(diào)Sur

10、vivin蛋白表達(dá)FI具有顯著性差異(P<0.05)。 5 RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示：12.5μmol/L，50μmol/L，10μmol/L，15μmol/L Celecoxib各處理組作用Raji細(xì)胞48h后Survivin mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為0.73±0.033，0.67±0.038，0.61±0.013，0.54±0.039。對(duì)照組的Survivin mRNA相對(duì)表達(dá)量為0.79±0.018，Celecoxib各濃

11、度組SurviVin mRNA相對(duì)表達(dá)量與對(duì)照組相比，差異均具有顯著意義(P<0.05)。Celecoxib不同濃度組間下調(diào)SurviVinmRNA相對(duì)表達(dá)量具有顯著性差異(P<0.05)。 結(jié)論： 1 Celecoxib體外對(duì)Raii淋巴瘤細(xì)胞生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用，且在12.5～15μmol/L范圍內(nèi)呈時(shí)間、劑量依賴性。 2 Celecoxib使Raii細(xì)胞GO/G1期細(xì)胞數(shù)增多，S和G2/M期細(xì)胞數(shù)減少

12、。通過阻滯細(xì)胞周期于GO/G1期，抑制Raii細(xì)胞的增殖，此可能為非COX-2依賴性途徑作用機(jī)制之一。 3 本研究觀察到，藥物干預(yù)前，Raii淋巴瘤細(xì)胞中SurvivinmRNA與Survivin蛋白的一致性高表達(dá)，提示Raii淋巴瘤細(xì)胞中Survivin在轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)翻譯水平上表達(dá)均增加。 4 Celecoxib體外可抑制Raji淋巴瘤細(xì)胞中SurVivin蛋白及Survivin mRNA的表達(dá)，并呈明顯的劑量依賴關(guān)