塞來昔布與阿霉素對(duì)Raji細(xì)胞增殖和凋亡作用及機(jī)制的研究.pdf

1、目的：非甾體類抗炎藥(nonsteroidal anti-inflammatory drugs，NSAIDs)對(duì)多種腫瘤如腸癌、乳腺癌、肺癌等具有抗腫瘤作用，研究表明通過環(huán)氧化酶(cyclooxygenase，COXs)依賴機(jī)制和非COXs依賴機(jī)制起作用。本研究通過體外培養(yǎng)人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞系Raji細(xì)胞株，觀察選擇性COX-2抑制劑塞來昔布(Celecoxib)對(duì)Raji細(xì)胞增殖、凋亡、凋亡相關(guān)基因半胱氨酸蛋白酶-9(ca

2、spase-9)的表達(dá)水平的影響，探討聯(lián)合應(yīng)用阿霉素(adriamycin，ADM)對(duì)Raji細(xì)胞增殖、凋亡的影響及相關(guān)機(jī)制。 方法：體外培養(yǎng)Raji細(xì)胞，分為對(duì)照組，塞來昔布組，阿霉素組，塞來昔布+阿霉素組。光鏡下觀察瑞氏染色后細(xì)胞形態(tài)變化，應(yīng)用噻唑藍(lán)(MTT)還原法檢測(cè)細(xì)胞增殖率，用流式細(xì)胞儀(FCM)分析細(xì)胞凋亡率，逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)caspase-9 mRNA表達(dá)，細(xì)胞免疫組化法測(cè)caspase-9

3、蛋白表達(dá)。統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS13.0軟件。所有數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，P<0.05認(rèn)為差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果：光鏡下可見塞來昔布處理的細(xì)胞有凋亡改變。單獨(dú)應(yīng)用0.1μg/ml阿霉素處理24h細(xì)胞的增殖率為(93.41±3.16)％，不同濃度的塞來昔布(20、40、60、80、100μmol/L)處理24h細(xì)胞的增殖率分別為(93.56±2.08)％，(86.16±2.27)％，(63.92±3.17)％，(23.21±2.3

4、5)％，(18.27±1.36)％；均較對(duì)照組降低(P<0.05)。塞來昔布+阿霉素組細(xì)胞24h的增殖率分別為：(80.58±1.95)％，(64.28±1.55)％，(41.62±1.79)％，(12.64±2.45)％，0；與單獨(dú)應(yīng)用二藥相比明顯降低細(xì)胞的增殖率(P<0.05)。 流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示對(duì)照組細(xì)胞24h凋亡率為(3.50±1.18)％，應(yīng)用塞來昔布(20、40、60、80、100μmol/L)24h分別為(5.0

5、1±0.80)％，(14.00±1.68)％，(34.33±4.47)％，(57.63±2.27)％，(67.50±2.00％)；除20μmol/L組外，與對(duì)照組相比，均有升高(P<0.05)。0.1μg/ml阿霉素，60μM塞來昔布+0.1μg/ml阿霉素分別作用Raji細(xì)胞24h，細(xì)胞凋亡率分別為(7.62±1.23)％，(48.07±2.32)％，60μM塞來昔布+0.1μg/ml阿霉素與單獨(dú)用藥相比，凋亡率有升高(P<0.05)

6、。 對(duì)照組24h無caspase-9 mRNA表達(dá)。塞來昔布組細(xì)胞24h后caspase-9 mRNA表達(dá)分別為0.13±0.04，0.23±0.02，0.34±0.14，0.48±0.04，0.60±0.01；與對(duì)照組相比表達(dá)均上調(diào)(P<0.05)。塞來昔布60μM處理Raji細(xì)胞48h，72h細(xì)胞caspase-9 mRNA表達(dá)分別為0.41±0.14，0.51±0.01，和24h相比顯著升高(P<0.05)。0.1μg/m

7、l阿霉素作用Raji細(xì)胞24hCaspase-9 mRNA表達(dá)為0.09±0.03。60μM塞來昔布聯(lián)合0.1μg/ml阿霉素作用Raft細(xì)胞24h后，Caspase-9 mRNA表達(dá)為0.47±0.02，較單用二藥表達(dá)升高(P<0.05)。 對(duì)照組細(xì)胞24h無caspase-9蛋白表達(dá)。塞來昔布處Raji細(xì)胞24小時(shí)后caspase-9蛋白表達(dá)分別為(6.75±1.57)％，(19.00±1.41)％，(26.00±1.41)

8、％(38.50±2.12)％，(52.00±2.83)％，與對(duì)照組相比均升高(P<0.05)。0.1μg/ml阿霉素作用Raji細(xì)胞24h，Caspase-9蛋白表達(dá)為(6.23±1.12)％。60μM塞來昔布聯(lián)合0.1μg//ml阿霉素作用Raji細(xì)胞24h后，Caspase-9蛋白表達(dá)為(37.50±3.54)％，高于使用單藥(P<0.05)。 結(jié)論： 1.塞來昔布在20μM～100μM濃度范圍內(nèi)，能抑制Raji細(xì)胞