塞來昔布與阿霉素對Raji細胞增殖和凋亡作用及機制的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:非甾體類抗炎藥(nonsteroidal anti-inflammatory drugs,NSAIDs)對多種腫瘤如腸癌、乳腺癌、肺癌等具有抗腫瘤作用,研究表明通過環(huán)氧化酶(cyclooxygenase,COXs)依賴機制和非COXs依賴機制起作用。本研究通過體外培養(yǎng)人Burkitt's淋巴瘤細胞系Raji細胞株,觀察選擇性COX-2抑制劑塞來昔布(Celecoxib)對Raji細胞增殖、凋亡、凋亡相關基因半胱氨酸蛋白酶-9(ca

2、spase-9)的表達水平的影響,探討聯(lián)合應用阿霉素(adriamycin,ADM)對Raji細胞增殖、凋亡的影響及相關機制。 方法:體外培養(yǎng)Raji細胞,分為對照組,塞來昔布組,阿霉素組,塞來昔布+阿霉素組。光鏡下觀察瑞氏染色后細胞形態(tài)變化,應用噻唑藍(MTT)還原法檢測細胞增殖率,用流式細胞儀(FCM)分析細胞凋亡率,逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(RT-PCR)法檢測caspase-9 mRNA表達,細胞免疫組化法測caspase-9

3、蛋白表達。統(tǒng)計分析采用SPSS13.0軟件。所有數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差表示,P<0.05認為差別有統(tǒng)計學意義。 結(jié)果:光鏡下可見塞來昔布處理的細胞有凋亡改變。單獨應用0.1μg/ml阿霉素處理24h細胞的增殖率為(93.41±3.16)%,不同濃度的塞來昔布(20、40、60、80、100μmol/L)處理24h細胞的增殖率分別為(93.56±2.08)%,(86.16±2.27)%,(63.92±3.17)%,(23.21±2.3

4、5)%,(18.27±1.36)%;均較對照組降低(P<0.05)。塞來昔布+阿霉素組細胞24h的增殖率分別為:(80.58±1.95)%,(64.28±1.55)%,(41.62±1.79)%,(12.64±2.45)%,0;與單獨應用二藥相比明顯降低細胞的增殖率(P<0.05)。 流式細胞儀檢測顯示對照組細胞24h凋亡率為(3.50±1.18)%,應用塞來昔布(20、40、60、80、100μmol/L)24h分別為(5.0

5、1±0.80)%,(14.00±1.68)%,(34.33±4.47)%,(57.63±2.27)%,(67.50±2.00%);除20μmol/L組外,與對照組相比,均有升高(P<0.05)。0.1μg/ml阿霉素,60μM塞來昔布+0.1μg/ml阿霉素分別作用Raji細胞24h,細胞凋亡率分別為(7.62±1.23)%,(48.07±2.32)%,60μM塞來昔布+0.1μg/ml阿霉素與單獨用藥相比,凋亡率有升高(P<0.05)

6、。 對照組24h無caspase-9 mRNA表達。塞來昔布組細胞24h后caspase-9 mRNA表達分別為0.13±0.04,0.23±0.02,0.34±0.14,0.48±0.04,0.60±0.01;與對照組相比表達均上調(diào)(P<0.05)。塞來昔布60μM處理Raji細胞48h,72h細胞caspase-9 mRNA表達分別為0.41±0.14,0.51±0.01,和24h相比顯著升高(P<0.05)。0.1μg/m

7、l阿霉素作用Raji細胞24hCaspase-9 mRNA表達為0.09±0.03。60μM塞來昔布聯(lián)合0.1μg/ml阿霉素作用Raft細胞24h后,Caspase-9 mRNA表達為0.47±0.02,較單用二藥表達升高(P<0.05)。 對照組細胞24h無caspase-9蛋白表達。塞來昔布處Raji細胞24小時后caspase-9蛋白表達分別為(6.75±1.57)%,(19.00±1.41)%,(26.00±1.41)

8、%(38.50±2.12)%,(52.00±2.83)%,與對照組相比均升高(P<0.05)。0.1μg/ml阿霉素作用Raji細胞24h,Caspase-9蛋白表達為(6.23±1.12)%。60μM塞來昔布聯(lián)合0.1μg//ml阿霉素作用Raji細胞24h后,Caspase-9蛋白表達為(37.50±3.54)%,高于使用單藥(P<0.05)。 結(jié)論: 1.塞來昔布在20μM~100μM濃度范圍內(nèi),能抑制Raji細胞

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