促孕原位凝膠灌注液的制備、表征及初步藥效學(xué)研究.pdf

1、促孕灌注液(Fertility-promoting Intrauterine Infusion Liquid，F(xiàn)PL)是防治母畜卵巢靜止和持久黃體不孕癥的純中藥成方制劑，由益母草、淫羊藿和紅花經(jīng)水提醇沉制得，其主要功能為補(bǔ)腎壯陽(yáng)、活血化瘀、催情促孕，深受獸醫(yī)臨床關(guān)注。但由于促孕灌注液灌入母畜子宮后易發(fā)生藥液泄漏，影響治療效果，且給藥頻率較高，增加了對(duì)母畜的刺激性，易造成母畜子宮機(jī)械損傷。
　　原位凝膠具有物理穩(wěn)定性高、緩釋、靶向性

2、好等優(yōu)點(diǎn)，是一種極有發(fā)展前景的新型給藥系統(tǒng)，已在臨床廣泛用于皮膚、眼部、鼻腔、口腔、陰道、直腸等不同給藥途徑以控制藥物釋放。泊洛沙姆是制備溫度敏感型原位凝膠的常用基質(zhì)材料，由于其溫敏性好，泊洛沙姆凝膠已廣泛用于藥物載體的研究。
　　本實(shí)驗(yàn)以FPL為模型中藥，對(duì)其原位凝膠的制備、體外釋放、體外溶蝕、體內(nèi)藥效學(xué)特性進(jìn)行考察，以期成功制備得到用于子宮灌注給藥的促孕原位凝膠灌注液（Fertility-promoting Intrauter

3、ine Infusion in situ Gel，F(xiàn)PG），改善FPL臨床應(yīng)用時(shí)發(fā)生泄漏和給藥頻率高等不足，增加藥物的生物利用率和療效。
　　分別建立了淫羊藿苷和總黃酮的體外分析方法。淫羊藿苷濃度與峰面積的回歸方程為:S=43690.18C+16581.14(R2=0.9997)，總黃酮濃度與吸光度的回歸方程為:A=0.0246C+0.0174(R2=0.9993)。為考察FPL制備過程中的各因素對(duì)提取效率的影響，分別以淫羊藿苷和

4、總黃酮為指標(biāo)，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用響應(yīng)面的中心組合設(shè)計(jì)法優(yōu)化提取工藝參數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，液料比、煎煮時(shí)間、提取次數(shù)3個(gè)因素對(duì)促孕灌注液中淫羊藿苷和總黃酮的提取率均有較明顯地影響，而浸泡時(shí)間對(duì)提取率的影響較小。經(jīng)響應(yīng)面法優(yōu)化后得到的最優(yōu)提取工藝為:提取時(shí)間10 min，液料比為17.5 mL/g，提取時(shí)間為38 min，提取次數(shù)為3次。分別得到促孕灌注液中淫羊藿苷提取率和總黃酮的提取率對(duì)液料比(A)、煎煮時(shí)間(B)、提取次數(shù)(C)的

5、二次多項(xiàng)回歸模型為:淫羊藿苷提取率（mg/g）=2.23+0.097 A+0.037 B+0.021 C+4.445×10-3 AB+0.14 AC+0.14 BC-0.17 A2-0.10 B2-0.37 C2?？傸S酮提取率(mg/g)=14.11+0.16 A+0.27 B+0.60 C+0.21 AB+0.056 AC+0.099 BC-0.55 A2-0.36 B2-0.66 C2。
　　分別考察泊洛沙姆407、泊洛沙姆1

6、88、羥丙甲基纖維素、海藻酸鈉等對(duì)膠凝溫度的影響。結(jié)果顯示，泊洛沙姆407和泊洛沙姆188的含量對(duì)膠凝溫度有明顯地影響，而羥丙甲基纖維素和海藻酸鈉對(duì)膠凝溫度的影響不明顯。向空白凝膠中加入FPL會(huì)使原位凝膠的膠凝溫度明顯地降低。結(jié)果顯示，配比為18％P407+5.0％P188+0.3％SA+FPL,18％P407+7.5％P188+0.3％HPMC+FPL和19％P407+2.5％P188+0.3％HPMC+FPL的凝膠的膠凝溫度分別為2

7、9.3±0.3，27.9±0.2和27.3±0.4℃，較合適。取以上三種配方的原位凝膠進(jìn)行體外溶蝕和體外釋放試驗(yàn)。結(jié)果顯示，3種原位凝膠在5h時(shí)，F(xiàn)PG溶蝕率和藥物釋放率均達(dá)到約90％。分別以3種凝膠的累積釋藥率（η)對(duì)累積溶蝕率(X)作圖，得回歸方程分別為η=0.9282X-0.0012(R2=0.9915),η=0.9806X-0.0331(R2=0.9936),η=1.0021X-0.0183(R2=0.9978)，線性關(guān)系良好，

8、且擬合方程的斜率接近1，表明凝膠溶蝕是控制藥物釋放的主要因素。
　　將制備得到的FPG注入到大鼠皮下，溶膠迅速在皮下轉(zhuǎn)變成半固體凝膠，說明本實(shí)驗(yàn)制備的原位凝膠在體內(nèi)有較好的膠凝的特性，符合試驗(yàn)預(yù)期和臨床用藥要求?？疾霧PL與FPG對(duì)子宮指數(shù)和卵巢指數(shù)的影響，并將大鼠的子宮進(jìn)行組織切片研究，觀察FPL和FPG對(duì)子宮內(nèi)膜的影響。結(jié)果顯示，F(xiàn)PL和FPG均能增加大鼠的子宮指數(shù)和卵巢指數(shù)，但是，F(xiàn)PG的效果更加的明顯。FPL和FPG對(duì)子宮

9、內(nèi)膜均沒有明顯組織損傷。以大鼠血清中雌二醇的含量為指標(biāo)，考察FPL和FPG對(duì)大鼠血清中雌二醇含量的影響。結(jié)果表明，持續(xù)給藥7天后，血清中的雌二醇含量明顯增加，且FPG組大鼠的雌二醇含量明顯高于FPL，隨著給藥時(shí)間的進(jìn)一步增加，F(xiàn)PG組大鼠的雌二醇含量逐漸降低，最后于FPL持平，但是均明顯高于給藥前大鼠血清中的雌二醇濃度。實(shí)驗(yàn)表明，將FPL制備成FPG后，可以使藥物緩慢釋放，有更好的藥效。將制備的FPG用安瓿灌封之后進(jìn)行低溫試驗(yàn)、高溫試驗(yàn)