葡萄籽原花青素聯(lián)合通心絡(luò)對(duì)兔實(shí)驗(yàn)性動(dòng)脈粥樣硬化預(yù)防性干預(yù)的研究.pdf

1、背景 動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)是大多數(shù)心腦血管疾病的重要病理基礎(chǔ)，會(huì)造成血管舒縮性降低、管腔變窄甚至阻塞以及血栓形成等病理改變，嚴(yán)重影響心臟及整個(gè)循環(huán)系統(tǒng)的功能，導(dǎo)致各種急性心血管事件的發(fā)生。因此，AS的發(fā)生機(jī)制以及藥物對(duì)AS的預(yù)防和治療作用研究成為國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。以往很長(zhǎng)時(shí)間，AS被認(rèn)為是一種老年性、退行性病變。但近年的研究發(fā)現(xiàn)AS是由于各種因素造成血管內(nèi)皮功能和結(jié)構(gòu)的損傷，多種細(xì)胞因子介導(dǎo)，血管

2、內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和白細(xì)胞等共同參與的慢性炎癥過程。葡萄籽原花青素(grapeseedproanthocyanidinextract，GSPE)是從葡萄籽中提取出來(lái)的一類多酚化合物，它具有極強(qiáng)的抗氧化等活性。通心絡(luò)是由人參、水蛭、全蝎、土鱉蟲、蜈蚣、赤芍、冰片等多種純天然中藥精制而成的中藥復(fù)方制劑，具有活血通絡(luò)、益氣補(bǔ)心的作用。我們的研究通過對(duì)動(dòng)物飼喂高膽固醇飲食，觀察GSPE、通心絡(luò)以及GSPE聯(lián)合通心絡(luò)對(duì)AS的預(yù)防性干預(yù)作用，旨在

3、探討GSPE和通心絡(luò)的抗AS的機(jī)制，以及兩種藥物聯(lián)合應(yīng)用對(duì)AS的影響，為臨床的使用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 目的 通過飼喂高膽固醇建立兔AS動(dòng)物模型，觀察GSPE、通心絡(luò)及GSPE聯(lián)合通心絡(luò)對(duì)AS的預(yù)防性干預(yù)作用，并從以下方面對(duì)其機(jī)制進(jìn)行探討。 (1)觀察GSPE、通心絡(luò)及GSPE聯(lián)合通心絡(luò)對(duì)AS兔血脂的影響； (2)觀察GSPE、通心絡(luò)及GSPE聯(lián)合通心絡(luò)對(duì)AS兔丙二醛(malondialdehyde，MDA)的

4、影響，研究其清除自由基、抗脂質(zhì)過氧化作用； (3)觀察GSPE、通心絡(luò)及GSPE聯(lián)合通心絡(luò)對(duì)AS兔血清一氧化氮(nitricoxide，NO)的影響，研究其內(nèi)皮保護(hù)作用； (4)觀察GSPE、通心絡(luò)及GSPE聯(lián)合通心絡(luò)對(duì)AS兔血清血管細(xì)胞黏附分子(vascularcelladhensionmolecule,VCAM-1)的影響，研究其抗內(nèi)皮黏附作用； (5)觀察GSPE、通心絡(luò)及GSPE聯(lián)合通心絡(luò)對(duì)AS兔血清白介

5、素6(interleukin6，IL-6)的影響，研究其抗內(nèi)皮炎癥作用； (6)對(duì)不同觀察組的兔的主動(dòng)脈、心、腦組織進(jìn)行大體、電鏡及免疫組織化學(xué)指標(biāo)的觀察和比較，證實(shí)GSPE、通心絡(luò)及GSPE聯(lián)合通心絡(luò)的抗AS作用； (7)研究GSPE與通心絡(luò)兩種藥物對(duì)AS的預(yù)防性干預(yù)作用是否存在協(xié)同效應(yīng)。 方法 (1)建立AS動(dòng)物模型并進(jìn)行GSPE、通心絡(luò)及GSPE聯(lián)合通心絡(luò)的預(yù)防性干預(yù)：選購(gòu)雄性新西蘭大白兔24只，分

6、籠喂養(yǎng)，飲水不限，飼料量為每只每天100-120g，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后進(jìn)入實(shí)驗(yàn)。將其隨機(jī)分為4組，高脂模型對(duì)照組(control)、GSPE預(yù)防干預(yù)組(a)、通心絡(luò)預(yù)防干預(yù)組(b)、GSPE聯(lián)合通心絡(luò)預(yù)防干預(yù)組(ab)，每組6只，分別飼喂與標(biāo)準(zhǔn)飼料均勻混合的含1％膽固醇、1％膽固醇+1％GSPE、1％膽固醇+通心絡(luò)(1g/kg.d)、1％膽固醇+1％GSPE+通心絡(luò)(1g/kg.d)的顆粒飼料。各組兔分別于實(shí)驗(yàn)開始前1天及開始后的第4、8

7、、12周周末，在清晨空腹稱重后，經(jīng)耳中動(dòng)脈采血，留取血清標(biāo)本。實(shí)驗(yàn)的第12周末，各組兔經(jīng)耳中動(dòng)脈采血后，空氣栓塞處死，留取主動(dòng)脈、心、腦、腎組織進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察和免疫組織化學(xué)檢查。 (2)血清學(xué)研究：取上述4組兔的空腹血清標(biāo)本，應(yīng)用日立7170型全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清總膽固醇(totalcholesterol，TC)、甘油三酯(triglyceride，TG)、低密度脂蛋白膽固醇(lowdensitylipoproteincho

8、lesterol，LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(highdensitylipoproteincholesterol，HDL-C)含量；應(yīng)用比色法測(cè)定血清MDA含量；應(yīng)用硝酸還原酶法測(cè)定血清NO含量；應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)雙抗體夾心法測(cè)定血清VCAM-1、IL-6含量。 (3)病理學(xué)研究：對(duì)上述4組兔的主動(dòng)脈、心、腦組織標(biāo)本進(jìn)行病理組織切片，應(yīng)用光鏡和電鏡觀

9、察主動(dòng)脈、心、腦組織標(biāo)本病理改變并拍照。對(duì)主動(dòng)脈進(jìn)行CD68、α-actin、VCAM-1免疫組織化學(xué)染色，觀察主動(dòng)脈血管內(nèi)膜的病理改變并拍照。 (4)統(tǒng)計(jì)方法：各項(xiàng)測(cè)定值均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)分析系統(tǒng)，多組間差異比較用ANOVA檢驗(yàn)，兩組間差異比較用LSD檢驗(yàn)，雙側(cè)p＜0.05為有顯著差異。 結(jié)果 (1)與高脂模型對(duì)照組相比，GSPE對(duì)兔血脂無(wú)明顯影響(P＞0.05)，能顯著降

10、低血清MDA水平(8-12周末，P＜0.05)，顯著增加血清NO水平(4-12周末，P＜0.001)，顯著降低血清VCAM-1水平(4-12周末，P＜0.001)，顯著降低血清IL-6水平(4周末，P＜0.05；8-12周末，P＜0.001)。GSPE能減輕兔實(shí)驗(yàn)性AS的病變程度，增加斑塊的穩(wěn)定性。 (2)與高脂模型對(duì)照組相比，通心絡(luò)對(duì)兔血脂影響不明顯(P＞0.05)，能顯著降低血清MDA(12周末，P＜0.05)，顯著增加血清

11、NO水平(4-12周末，P＜0.001)，顯著降低血清VCAM-1水平(4周末，P＜0.05；8-12周末，P＜0.001)，顯著降低血清IL-6水平(8-12周末，P＜0.001)。通心絡(luò)能減輕兔實(shí)驗(yàn)性AS的病變程度，增加斑塊的穩(wěn)定性。 (3)與高脂模型對(duì)照組相比，GSPE聯(lián)合通心絡(luò)組對(duì)兔血脂影響不明顯(P＞0.05)，能顯著降低血清MDA(4周末，P＜0.05；8-12周末，P＜0.001)，顯著增加血清NO水平(4-12周

12、末，P＜0.001)，顯著降低血清VCAM-1水平(4-12周末，P＜0.001)，顯著降低血清IL-6水平(4周末，P＜0.01；8-12周末，P＜0.001)。GSPE聯(lián)合通心絡(luò)能減輕兔實(shí)驗(yàn)性AS的病變程度，增加斑塊的穩(wěn)定性。 (4)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，GSPE與通心絡(luò)聯(lián)合應(yīng)用對(duì)降低血清MDA水平可能存在協(xié)同作用，對(duì)增加血清NO水平有協(xié)同作用需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，對(duì)降低血清VCAM-1水平及降低血清IL-6水平證實(shí)存在協(xié)同作用。