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文檔簡介
1、研究背景淋巴管是血液循環(huán)的重要輔助管道,多與動靜脈相伴而行,血管滲出的蛋白、淋巴細胞以及組織間質(zhì)細胞產(chǎn)生的大分子物質(zhì)等主要經(jīng)過淋巴管重吸收,淋巴管在維持機體體液平衡及免疫功能中發(fā)揮重要作用。
胚胎時期,淋巴管主要是由胎兒主靜脈分化、發(fā)育而來的。而成人的淋巴管再生發(fā)生于組織再生、炎癥反應(yīng)、創(chuàng)傷愈合等多種生理以及病理情況下。
研究證實,淋巴管新生主要有兩種方式:原有淋巴管以出芽方式新生;外周血內(nèi)皮祖細胞(EPCs)遷移到
2、局部組織轉(zhuǎn)分化為淋巴管內(nèi)皮細胞。迄今為止,探索淋巴管內(nèi)皮細胞的生長與分化因素及其機制仍然是淋巴研究領(lǐng)域的重要課題。
有研究證實,淋巴管新生與核因子-κB(nuclearfactor-kappaB,NF-κB)通路的激活有十分密切的聯(lián)系。在成體炎性環(huán)境下,某些炎性介質(zhì)如LPS、IL-1β、IL-3和TNF-α等可以通過NF-κB通路誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞表達淋巴管內(nèi)皮標(biāo)志物Prox-1和VEGFR3等,誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞向淋巴管內(nèi)皮分化?;|(zhì)細
3、胞衍生因子-1α(Stromalcellderivedfactor-1,SDF-1α)是炎性環(huán)境中常見的細胞因子,并能夠激活NF-κB通路。體外實驗證實,SDF-1α能夠促進淋巴管內(nèi)皮細胞的遷移、成管。而SDF-1α能否誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞分化為淋巴管內(nèi)皮細胞,以及其在淋巴管新生中的作用鮮有報道。
研究發(fā)現(xiàn),SDF-1α/CXCR4軸在胎兒發(fā)育過程中,對血管系統(tǒng)的形成發(fā)揮了重要的作用,而在成人,SDF-1α/CXCR4軸可能參與了胃潰
4、瘍修復(fù)期血管的形成。在SDF-1α的刺激誘導(dǎo)下,人臍靜脈內(nèi)皮細胞株(HUVECs)和鼠腦毛細血管上皮細胞株(IBE)均能形成內(nèi)皮管型。以上研究證實,SDF-1α對胚胎及成人的血管新生都發(fā)揮了十分重要的作用。血管內(nèi)皮與淋巴管內(nèi)皮結(jié)構(gòu)上有許多相似之處,然而關(guān)于SDF-1α是否能夠促進淋巴管新生卻鮮有報道。
實驗?zāi)康挠貌煌瑵舛萐DF-1α分別刺激臍靜脈內(nèi)皮細胞,在蛋白和基因水平檢測相關(guān)標(biāo)志物的表達,探討SDF-1α對于誘導(dǎo)淋巴管內(nèi)皮
5、表型的作用,從而為進一步研究淋巴管形成機制及其相關(guān)疾病的治療提供依據(jù)。
材料和方法用含10%FBS的DMEM高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)血管內(nèi)皮細胞株CRL-1730,當(dāng)細胞長至60%-70%,處于對數(shù)生長期時進行實驗。用不同濃度的SDF-1α分別處理內(nèi)皮細胞株CRL-1730,用實時熒光定量-PCR、Westernblotting及免疫細胞化學(xué)等方法檢測其血管內(nèi)皮及淋巴管內(nèi)皮細胞標(biāo)志物的表達情況。用統(tǒng)計學(xué)分析軟件SPSS17.0對結(jié)果進行
6、統(tǒng)計學(xué)分析。
結(jié)果SDF-1α誘導(dǎo)培養(yǎng)之后,CRL-1730細胞株的內(nèi)皮細胞標(biāo)志物vWF、VE-cadherin、VEGFR2隨其濃度增高而表達降低,淋巴管標(biāo)志物podoplanin、Prox-1和LYVE-1隨其濃度增高而表達增高。SDF-1α能夠誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細胞表達淋巴管內(nèi)皮細胞標(biāo)志物。
意義本文首次研究了SDF-1α在內(nèi)皮細胞向淋巴管內(nèi)皮細胞轉(zhuǎn)分化中的作用。本實驗證實SDF-1α能夠下調(diào)CRL-1730細胞株內(nèi)
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