淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子的表達(dá)及其在體外淋巴管新生中的作用.pdf

1、目的 研究粘附分子PECAM-1、ICAM-3、VCAM-1和CD44在組織淋巴管內(nèi)皮和培養(yǎng)LECs的表達(dá),通過建立體外三維淋巴管形成模型,研究內(nèi)皮粘附分子在LECs增殖、遷移和管樣結(jié)構(gòu)形成中的作用.方法 取狗的空腸和腹前壁皮膚,作冰凍切片,用免疫組織化學(xué)染色法標(biāo)記粘附分子在組織淋巴管內(nèi)皮的表達(dá).分離和培養(yǎng)鉻胸導(dǎo)管的LECs,用免疫熒光染色法標(biāo)記粘附分子在LECs的表達(dá),在共聚焦激光掃描顯微鏡下觀察.用圖像分析系統(tǒng)分析粘附分子表達(dá)的OD

2、值,并與TNF-α或LPS刺激細(xì)胞的表達(dá)進(jìn)行比較.內(nèi)皮細(xì)胞用TNF-α或LPS刺激后,分別阻斷PECAM-1、ICAM-3和CD44,計(jì)數(shù)細(xì)胞增殖數(shù)目和計(jì)算細(xì)胞遷移率.制備體外三維I型膠原蛋白凝膠淋巴管形成模型,阻斷PECAM-1、ICAM-3和CD44后,觀察管樣結(jié)構(gòu)的形成,測量管樣結(jié)構(gòu)的長度和面積,并在透射電鏡下觀察其特征.結(jié)果 小腸和皮膚內(nèi)的淋巴管內(nèi)皮PECAM-1和ICAM-3呈免疫反應(yīng)陽性.培養(yǎng)的LECs表達(dá)PECAM-1、I

3、CAM-3和CD44,不表達(dá)VCAM-1.用TNF-α刺激LECs表達(dá)的OD值與正常對照組無明顯差別,CD44和OD值低于正常對照組.用LPS刺激細(xì)胞后,PECAM-1、ICAM-3和CD44表達(dá)的OD值均無顯著性變化.用TNF-α或LPS刺激細(xì)胞后,VCAM-1呈弱表達(dá).在對照組以及TNF-α和LPS刺激組,阻斷PECAM-1或CD44后,細(xì)胞的增殖數(shù)目降低,但阻斷ICAM-3后細(xì)胞的增殖數(shù)目無明顯變化.分別阻斷PECAM-1、ICA