β2SP對(duì)肝癌細(xì)胞誘導(dǎo)分化作用.pdf

1、目的：探討β2SP（β2血影蛋白）對(duì)肝癌細(xì)胞Huh7和SNU398誘導(dǎo)分化作用
　　方法：構(gòu)建人的β2SP真核表達(dá)載體pcDNA3.1(-)-β2SP,酶切鑒定，測(cè)序證實(shí)。將構(gòu)建成功的β2SP cDNA真核表達(dá)載體以及對(duì)照質(zhì)粒pcDNA3.1(-)分別轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞Huh7和SUN398,48h后Real-time RT-PCR和Western blot檢測(cè)β2SP在上述肝癌細(xì)胞中的表達(dá)情況。同時(shí)分析（1）β2SP對(duì)肝癌細(xì)胞Huh7

2、和SNU398腫瘤生物學(xué)特性的影響：CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖；Western blot檢測(cè)細(xì)胞周期蛋白（CyclinA2、B1、D1、E1、CDK4）、凋亡相關(guān)蛋白C-caspase3以及p53、pRb；流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期。（2）β2SP對(duì)肝癌細(xì)胞Huh7和SNU398誘導(dǎo)分化作用：Real-time RT-PCR分析肝臟功能蛋白（ALB、HNF1、HNF4、G6PC、OAT、ADH1、CRP、CYP7A1）和肝癌特異性腫瘤標(biāo)志物AF

3、P的表達(dá)；Real-time RT-PCR分析肝癌干細(xì)胞表面標(biāo)記物表達(dá)（CD133、CD90、EPCAM、CK19）。
　　結(jié)果：（1）經(jīng)過(guò)鑒定證實(shí)成功構(gòu)建了真核表達(dá)載體pcDNA3.1(-)-β2SP。
　?。?）Real-time RT-PCR和Western blot結(jié)果顯示，β2SP cDNA真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞Huh7和SNU398后，β2SP的表達(dá)明顯上調(diào)。
　?。?）β2SP cDNA真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染