人參皂苷對(duì)K562細(xì)胞的增殖抑制及誘導(dǎo)分化作用.pdf

1、目的:
　　 細(xì)胞增殖失控、分化成熟受阻、正常的凋亡程序失調(diào)、導(dǎo)致異常分化細(xì)胞大量增殖是白血病細(xì)胞疾病的生物學(xué)特點(diǎn)。因此白血病的有效治療方法就是抑制細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)異常分化的細(xì)胞向成熟或者較成熟細(xì)胞方向分化。人參是祖國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的“補(bǔ)血”要藥,人參總皂苷(total saponins of panax ginseng,TSPG)是其主要藥理成分。目前從人參中提取的人參皂苷單體有30多種,其藥理效應(yīng)和作用機(jī)制不盡相同。人參皂苷Re(g

2、ensingnoside Re)是人參皂苷的一類(lèi)主要有效成分,質(zhì)量分?jǐn)?shù)約占人參總皂苷的30％,目前人參皂苷Re對(duì)白血病細(xì)胞的分化誘導(dǎo)作用尚未見(jiàn)報(bào)道。本課題以慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株K562為研究對(duì)象,觀察不同濃度TSPG和Re作用后,K562細(xì)胞的增殖和分化情況,探討TSPG和Re對(duì)白血病的作用,為更深入的機(jī)制研究奠定基礎(chǔ)。
　　 方法:
　　 1.以慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株K562為研究對(duì)象,觀察不同濃度TSPG對(duì)K562

3、細(xì)胞不同作用時(shí)間點(diǎn)的增殖抑制情況:采用MTT噻唑藍(lán)比色試驗(yàn)測(cè)定不同濃度TSPG作用K562細(xì)胞不同時(shí)間點(diǎn)的抑制率;臺(tái)盼藍(lán)拒染活細(xì)胞計(jì)數(shù)不同濃度TSPG作用K562細(xì)胞不同時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞存活率。
　　 2.觀察不同濃度TSPG和Re誘導(dǎo)K562向紅系細(xì)胞分化情況:測(cè)定不同濃度TSPG和Re作用K562細(xì)胞48小時(shí)和/或者72小時(shí)后,K562細(xì)胞平均血紅蛋白含量。不同濃度TSPG和Re作用K562細(xì)胞不同時(shí)間后計(jì)數(shù)其聯(lián)苯胺染色陽(yáng)性率。

4、
　　 3.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志物和凋亡率:400 mg/L的TSPG作用K562細(xì)胞48小時(shí)后檢測(cè)其凋亡率。90μmol/L的Re作用K562細(xì)胞24h,48h,72h后檢測(cè)細(xì)胞表面CD13、CD15、GPA。
　　 結(jié)果:
　　 1.TSPG對(duì)K562細(xì)胞的影響:MTT和臺(tái)盼藍(lán)計(jì)數(shù)顯示TSPG濃度在200 mg/L-800 mg/L范圍內(nèi)對(duì)K562細(xì)胞增殖有抑制作用,并呈濃度和時(shí)間依賴(lài)性。聯(lián)苯胺染色提示

5、不同濃度TSPG作用K562細(xì)胞的陽(yáng)性率與對(duì)照組比較無(wú)明顯差異;血紅蛋白測(cè)定結(jié)果顯示不同濃度TSPG作用。K562細(xì)胞的血紅蛋白含量與對(duì)照組相比有顯著差異(P＜0.05),但不同濃度TSPG組間并無(wú)差異。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示TSPG400mg/L組細(xì)胞凋亡率與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2.Re對(duì)K562細(xì)胞的影響:人參皂苷Re90μmol/L可以誘導(dǎo)K562細(xì)胞向早期紅系細(xì)胞分化,表現(xiàn)為:K562細(xì)胞

6、形態(tài)學(xué)上可見(jiàn)細(xì)胞體積縮小,核直徑減小,胞漿豐富,核漿比例降低;Re在體外對(duì)K562細(xì)胞有誘導(dǎo)血紅蛋白生成的作用;細(xì)胞膜表面CD13陽(yáng)性率增加。
　　 結(jié)論:
　　 1.TSPG濃度在200 mg/L-800 mg/L范圍內(nèi)對(duì)K562細(xì)胞增殖有抑制作用,并呈濃度和時(shí)間依賴(lài)性。TSPG可誘導(dǎo)K562細(xì)胞分化。TSPG對(duì)K562細(xì)胞的增殖抑制作用可能與誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡有關(guān)。
　　 2.人參皂苷Re90μmol/L能