肝細胞核因子4α誘導(dǎo)肝癌細胞分化機制研究.pdf

1、第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文肝細胞核因子4α誘導(dǎo)肝癌細胞分化機制研究姓名：侯俊良申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)（消化系病）指導(dǎo)教師：謝渭芬20090501第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文讀取和處理數(shù)據(jù)。實時定量RT—PCR(realtimereversetranscriptionpolymerasechainreaction)驗證基因芯片結(jié)果中部分差異表達基因，包括EMT主要差異標志基因(TGFBR2、SMAD5、FSPl和NCadherin)和W

2、nffi3一Catenin信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路主要差異表達基因(DIⅨ4、FZD2、FRATl和AXINl)。二、HNF4a對肝癌細胞EMT過程的作用采用實時定量RTPCR方法檢測AdHNF4a和對照病毒AdGFP感染Hep3B細胞和HepG2細胞72小時后，EMT過程主要標志基因(TGFBR2、SMAD5、FSPl、N—Cadherin、ECadherin、Vimentin、Fibronectinl、plakoglobin、ZO—l、TGFI

3、BI和SMAD2)的表達水平。以免疫熒光細胞化學(xué)方法檢測AdHNF4a和AdGFP感染Hep3B及HepG2后EMT過程主要標志蛋白ECadherin、Vimentin和TGFpI表達情況。將Hep3B細胞接種于裸鼠腋窩皮下建立人肝癌小鼠皮下種植瘤模型，造模成功后分別以AdHNF4a和AdGFP進行瘤內(nèi)注射4次，處死裸鼠獲得種植瘤組織標本，免疫組織化學(xué)方法檢測上皮標志ECadherin和間質(zhì)標志Vimentin的表達。三、HNF4a對肝

4、癌細胞Wnt／pCatenin信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的作用實時定量RTPCR測定AdHNF4a作用于Hep3B細胞和HepG2細胞后，Wnt／p—Cmemn信號通路主要基因(DKK4、FZD2、FRATl、AXINl、I]Catenin、GSK3p和DSH)表達水平的變化。采用免疫熒光細胞化學(xué)方法在Hep3B及HepG2細胞上檢測Wnt／13Catenin信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路核心蛋白I]Catenin和主要差異表達蛋白DKK4。免疫組織化學(xué)方法檢測裸鼠皮

5、下肝癌種植瘤內(nèi)注射AdHNF4a和AdGFP后13Catenin和DKK4的表達情況。【實驗結(jié)果】一、HNF4a對Hep3B細胞基因表達譜的影響AdHNF4a感染Hep3B細胞48小時后363個基因上調(diào)，435個基因下調(diào)；72小時1058個基因上調(diào)，1375個基因下調(diào)；48小時及72小時兩時間點286個基因共同上調(diào)，148個基因共同下調(diào)。其中，兩個時間點的上調(diào)基因主要參與的生物學(xué)進程為代謝進程、生物學(xué)調(diào)節(jié)、發(fā)育進程、細胞交流、解剖學(xué)結(jié)構(gòu)