小鼠前列腺癌細(xì)胞對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化作用的初步研究.pdf

1、目的:
　　在體外共培養(yǎng)環(huán)境中小鼠前列腺癌細(xì)胞對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化其機(jī)制進(jìn)行初步探討，補(bǔ)充并完善骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在前列腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用的小鼠模型，從而為前列腺癌細(xì)胞通過自分泌/融合機(jī)制誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向前列腺癌細(xì)胞方向分化奠定了一定的理論基礎(chǔ)，并提出了一種嶄新的癌細(xì)胞來源理論，為當(dāng)代腫瘤的臨床治療和科學(xué)研究提供了一個新的方向。
　　方法:
　　解剖標(biāo)記有綠色熒光蛋白的小鼠，獲得雙下肢股骨和腓骨，沖洗骨髓腔

2、得到全骨髓，應(yīng)用貼壁培養(yǎng)篩選方法，選取10％胎牛血清、適當(dāng)?shù)募?xì)胞接種密度等條件進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，對小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的鑒定，則通過倒置相差光學(xué)顯微鏡觀察光鏡下細(xì)胞形態(tài)，通過脂肪誘導(dǎo)分化試劑培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，并使用油紅O染色來鑒定其干細(xì)胞特性，最后采用流式細(xì)胞學(xué)檢測CD90、CD105、CD34和CD45指標(biāo)染色結(jié)果對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞表型鑒定，分離和擴(kuò)增則待細(xì)胞分裂貼壁90％以上即進(jìn)行細(xì)胞傳代。
　　在體外環(huán)境中進(jìn)行MSC

3、與小鼠前列腺癌細(xì)胞的非接觸式共培養(yǎng)，共培養(yǎng)72小時后，在倒置相差光學(xué)顯微鏡下觀察MSC的形態(tài)變化，后通過文獻(xiàn)篩查選取特異性較高的前列腺干細(xì)胞抗原(PSCA)指標(biāo)作為小鼠前列腺癌細(xì)胞的標(biāo)記物，并對非接觸式共培養(yǎng)的MSC進(jìn)行免疫組化染色觀察，進(jìn)而對于前列腺癌細(xì)胞是否可以誘導(dǎo)MSC向其分化的結(jié)果進(jìn)行初步的判斷。
　　結(jié)果:
　　通過貼壁篩選方法進(jìn)行分離和擴(kuò)增，得到穩(wěn)定傳代的成纖維細(xì)胞型、長梭型、星型等多型性細(xì)胞形態(tài)，并對T3傳代細(xì)

4、胞進(jìn)行脂肪誘導(dǎo)分化后得到明顯有脂肪分化傾向的MSC，另還通過流式細(xì)胞學(xué)檢查進(jìn)行細(xì)胞表型鑒定，結(jié)果提示CD90陽性，CD105陽性，CD34陰性，CD45陰性。
　　在體外環(huán)境中進(jìn)行MSC與小鼠前列腺癌細(xì)胞非接觸式共培養(yǎng)后72小時，觀察結(jié)果提示:1、共培養(yǎng)后觀察光鏡下MSC細(xì)胞形態(tài)依然為多形性，邊界清晰，與單獨(dú)培養(yǎng)結(jié)果無明顯異常。2、T3傳代細(xì)胞進(jìn)行脂肪誘導(dǎo)分化結(jié)果顯示油紅O染色呈現(xiàn)粉紅色陽性結(jié)果。3、選取小鼠前列腺癌細(xì)胞特異性高的

5、PSCA指標(biāo)對共培養(yǎng)后的MSC進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，提示有弱陽性結(jié)果。
　　結(jié)論:
　　1、本實驗通過貼壁篩選方法和適當(dāng)?shù)募?xì)胞培養(yǎng)條件，成功分離和擴(kuò)增培養(yǎng)得到穩(wěn)定傳代的符合克隆樣生長和成纖維樣細(xì)胞等形態(tài)特征，并且通過油紅O染色、流式細(xì)胞學(xué)檢查驗證了具有干細(xì)胞特性的貼壁生長的小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。
　　2、本研究通過體外環(huán)境非接觸式共培養(yǎng)小鼠前列腺癌細(xì)胞與MSC，初步證實了經(jīng)過72小時共培養(yǎng)后，MSC中的部分細(xì)胞表型發(fā)生