小鼠前列腺癌細胞對骨髓間充質(zhì)干細胞誘導(dǎo)分化作用的初步研究.pdf

1、目的:
　　在體外共培養(yǎng)環(huán)境中小鼠前列腺癌細胞對骨髓間充質(zhì)干細胞誘導(dǎo)分化其機制進行初步探討，補充并完善骨髓間充質(zhì)干細胞在前列腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用的小鼠模型，從而為前列腺癌細胞通過自分泌/融合機制誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細胞向前列腺癌細胞方向分化奠定了一定的理論基礎(chǔ)，并提出了一種嶄新的癌細胞來源理論，為當代腫瘤的臨床治療和科學(xué)研究提供了一個新的方向。
　　方法:
　　解剖標記有綠色熒光蛋白的小鼠，獲得雙下肢股骨和腓骨，沖洗骨髓腔

2、得到全骨髓，應(yīng)用貼壁培養(yǎng)篩選方法，選取10％胎牛血清、適當?shù)募毎臃N密度等條件進行細胞培養(yǎng)，對小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的鑒定，則通過倒置相差光學(xué)顯微鏡觀察光鏡下細胞形態(tài)，通過脂肪誘導(dǎo)分化試劑培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細胞，并使用油紅O染色來鑒定其干細胞特性，最后采用流式細胞學(xué)檢測CD90、CD105、CD34和CD45指標染色結(jié)果對骨髓間充質(zhì)干細胞進行細胞表型鑒定，分離和擴增則待細胞分裂貼壁90％以上即進行細胞傳代。
　　在體外環(huán)境中進行MSC

3、與小鼠前列腺癌細胞的非接觸式共培養(yǎng)，共培養(yǎng)72小時后，在倒置相差光學(xué)顯微鏡下觀察MSC的形態(tài)變化，后通過文獻篩查選取特異性較高的前列腺干細胞抗原(PSCA)指標作為小鼠前列腺癌細胞的標記物，并對非接觸式共培養(yǎng)的MSC進行免疫組化染色觀察，進而對于前列腺癌細胞是否可以誘導(dǎo)MSC向其分化的結(jié)果進行初步的判斷。
　　結(jié)果:
　　通過貼壁篩選方法進行分離和擴增，得到穩(wěn)定傳代的成纖維細胞型、長梭型、星型等多型性細胞形態(tài)，并對T3傳代細

4、胞進行脂肪誘導(dǎo)分化后得到明顯有脂肪分化傾向的MSC，另還通過流式細胞學(xué)檢查進行細胞表型鑒定，結(jié)果提示CD90陽性，CD105陽性，CD34陰性，CD45陰性。
　　在體外環(huán)境中進行MSC與小鼠前列腺癌細胞非接觸式共培養(yǎng)后72小時，觀察結(jié)果提示:1、共培養(yǎng)后觀察光鏡下MSC細胞形態(tài)依然為多形性，邊界清晰，與單獨培養(yǎng)結(jié)果無明顯異常。2、T3傳代細胞進行脂肪誘導(dǎo)分化結(jié)果顯示油紅O染色呈現(xiàn)粉紅色陽性結(jié)果。3、選取小鼠前列腺癌細胞特異性高的

5、PSCA指標對共培養(yǎng)后的MSC進行免疫組織化學(xué)染色，提示有弱陽性結(jié)果。
　　結(jié)論:
　　1、本實驗通過貼壁篩選方法和適當?shù)募毎囵B(yǎng)條件，成功分離和擴增培養(yǎng)得到穩(wěn)定傳代的符合克隆樣生長和成纖維樣細胞等形態(tài)特征，并且通過油紅O染色、流式細胞學(xué)檢查驗證了具有干細胞特性的貼壁生長的小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞。
　　2、本研究通過體外環(huán)境非接觸式共培養(yǎng)小鼠前列腺癌細胞與MSC，初步證實了經(jīng)過72小時共培養(yǎng)后，MSC中的部分細胞表型發(fā)生