單純型大皰性表皮松解癥的K5和K14基因突變分析.pdf

1、背景:單純型大皰性表皮松解癥(epidermolysis bullosa simplex，EBS)是以表皮內(nèi)水皰為特征的較為少見的遺傳性皮膚病，發(fā)病率約為1:30,000.1:50,000，主要表現(xiàn)為皮膚脆性增加和摩擦部位水皰形成。根據(jù)臨床表現(xiàn)和超微形態(tài)，至少有11種亞型的EBS，其中7種為常染色體顯性遺傳，包括手足復(fù)發(fā)型(EBS-Weber Cokayne type，EBS.WC)、泛發(fā)型(EBS-Koebner type，EBS-K

2、)、皰疹樣型(EBS-Dowling Meara type， EBS.DM)為3種最常見類型，以及伴花斑狀色素沉著型(EBS'with mottledpigmentation，EBS-MP)、Ogna型、伴肌營(yíng)養(yǎng)不良型和伴遷移性紅斑型等少見類型.。手足復(fù)發(fā)型大皰性表皮松解癥始于兒童時(shí)期或者更晚,是最常見的一型，表現(xiàn)為機(jī)械刺激后手足部位厚壁水皰。泛發(fā)型大皰性表皮松解癥始于新生兒至嬰兒早期，多見于手足和四肢，可見掌跖過度角化和脫屑，多不累及

3、甲、齒和口腔粘膜。皰疹樣型出生時(shí)即可出現(xiàn)，是最嚴(yán)重的類型，水皰/血皰泛發(fā)全身，嚴(yán)重時(shí)可致新生兒死亡，與前兩型不同，氣候炎熱時(shí)癥狀好轉(zhuǎn)，口腔粘膜糜爛，甲板脫落和營(yíng)養(yǎng)不良，并伴有粟丘疹，預(yù)后不留瘢痕。EBS的致病基因是角蛋白5(K5)或角蛋白14(K14)基因，分別定位于12q1 l-q13和17q12-q21。到目前為止，在EBS患者中共發(fā)現(xiàn)約140種K5種IKl4基因突變(http：//www.interfil.org)。約有75-95

4、％的EBS患者能檢測(cè)到突變，且以點(diǎn)突變?yōu)橹?。K14或K5基因的突變會(huì)引起纖維結(jié)構(gòu)網(wǎng)絡(luò)的破壞，導(dǎo)致皮膚的脆性增加和水皰發(fā)生。然而，基因缺陷也可能位于K5和K14基因以外，最近發(fā)現(xiàn)，伴肌營(yíng)養(yǎng)不良的單純性大皰性表皮松解癥與角蛋白絲相關(guān)蛋白(plectin)突變相關(guān)。 目的：檢測(cè)3個(gè)中國(guó)漢族EBS家族和3例散發(fā)EBS患者的基因突變，為基因診斷和遺傳咨詢提供依據(jù)。 方法：收集3個(gè)中國(guó)漢族EBS家族和3例散發(fā)EBS患者及其家庭成員

5、和100名健康對(duì)照的外周血樣標(biāo)本，利用改良鹽析法提取外周血白細(xì)胞中的DNA，設(shè)計(jì)覆蓋K5和K14基因所有外顯子編碼區(qū)的18對(duì)引物，通過PCR反應(yīng)擴(kuò)增和直接測(cè)序進(jìn)行序列分析。 結(jié)果:本研究檢測(cè)了3個(gè)EBS家系和3例散發(fā)EBS患者，發(fā)現(xiàn)4個(gè)錯(cuò)義突變和1個(gè)移碼突變。家系1，先證者具有典型的EBS-MP型臨床表現(xiàn)和組織病理特征，家族中共有3代19人，其中6人患病，通過直接測(cè)序，發(fā)現(xiàn)患者K5基因9號(hào)外顯子均存在移碼突變c.1649delG

6、(p.Gly550AlafsX77)。家系2共有2代6人，其中3人患病，所有患者均攜帶K5基因1號(hào)外顯子c.508G>A(p.Glu.170Lys)錯(cuò)義突變。家系3有2代9人，3人患病，發(fā)現(xiàn)一個(gè)新的K14基因錯(cuò)義突變c.280G>A(p.Ala94Thr)'在患者。在2例散發(fā)EBS患者中分別在K5基因檢測(cè)到一個(gè)新的錯(cuò)義突變c.1730T>A.(p.Phe577Tyr)和K14基因6號(hào)外顯子重復(fù)錯(cuò)義突變c.1237G>A(p.Ala413

7、Thr)。有l(wèi)例EBS散發(fā)患者未檢測(cè)到基因突變。本研究同時(shí)對(duì)家系中非患者以及100例健康人對(duì)照進(jìn)行K5和K14基因突變篩查，未發(fā)現(xiàn)同樣堿基改變，證明以上突變是致病突變而不是單核苷酸多態(tài)性。 結(jié)論： K5基因錯(cuò)義突變c.508G>A(p.Glul70Lys)、c.1730T>A(p.Phe577Tlyr)，移碼突變c.1649delG(p.Gly550AlafsX77)，K14基因錯(cuò)義突變c.1237G>A(p.Ala413Thr