云南地區(qū)四種病原體在小獸類宿主中的感染特征研究.pdf

1、目的：
　　通過了解云南省部分地區(qū)小獸類宿主中巴爾通體、伯氏疏螺旋體、噬吞噬細(xì)胞無形體、斑點(diǎn)熱群立克次體四種病原體的感染情況、宿主構(gòu)成、遺傳進(jìn)化特征,為了解病原體生態(tài)學(xué)及流行病學(xué)特征及有目的的防控提供依據(jù)。
　　方法：
　　本次研究選取云南西部地區(qū)海拔分布900～4300米,北緯20°-30°,7市(州)12縣32個(gè)采樣地,采用夾夜法和誘捕法采集鼠,鑒定種類和性別,記錄緯度,海拔,植被類型等生境信息,記錄捕獲鼠類的體長

2、和種類,取脾臟,按照核酸提取試劑盒步驟提取脾臟組織DNA。采用分別針對巴爾通體(Bartonella)groEL基因、伯氏疏螺旋體(Borrelia burgdorferi sensu lato,B.b.s.l)5s-23srRNA基因片段、是嗜吞噬細(xì)胞無形體(Anaplasma phagocytophilum,AP)16srDNA基因片段、斑點(diǎn)熱群立克次體(Spotted fever group rickettsiae,SFGR)17

3、-kDa基因片段的特異性引物進(jìn)行巢式PCR實(shí)驗(yàn)擴(kuò)增基因,檢測陽性判定為陽性標(biāo)本,并將產(chǎn)物送測序公司測序,進(jìn)而進(jìn)行進(jìn)化分析。
　　數(shù)據(jù)采用率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,不同組間率的比較用χ2檢驗(yàn)、Fisher's確切概率法,病原體陽性率的影響因素分析采用poisson回歸模型。所有統(tǒng)計(jì)分析均運(yùn)用SPSS17.0以及SAS9.1.3軟件進(jìn)行;測序結(jié)果采用MEGA5.1軟件進(jìn)行比對,應(yīng)用Neighbor-Joining方法繪制系統(tǒng)發(fā)育樹。
　

4、　結(jié)果：
　　本次研究選用云南西部地區(qū)2005-2006,2009-2011五年間2310份小獸標(biāo)本,共11個(gè)種屬。四種病原體總體陽性率,其中412只檢測為巴爾通體陽性,陽性率為17.84％;伯氏疏螺旋體檢出陽性57只,陽性率為2.47%;嗜吞噬細(xì)胞無形體檢出陽性60只,陽性率2.60%;斑點(diǎn)熱群立克次體檢出陽性39只,陽性率為1.18%。不同氣候類型、海拔、小獸種屬間的巴爾通體、伯氏疏螺旋體、嗜吞噬細(xì)胞無形體的檢出率之間的差異具

5、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);在不同的棲息環(huán)境中,巴爾通體、伯氏疏螺旋體的檢出率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);而斑點(diǎn)熱群立克次體在不同氣候類型、海拔、棲息環(huán)境、小獸種屬、性別、年齡間的差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　本研究通過序列的遺傳進(jìn)化分析,發(fā)現(xiàn)本次研究所測得巴爾通體主要分三個(gè)種屬:B.tribocorum、B.birtlesii、B.rattimassiliensis;伯氏疏螺旋體共檢測到B.valaisia

6、na-ralated、B.garinii兩種;而從小獸宿主中擴(kuò)增到的斑點(diǎn)熱立克次體均為黑龍江立克次體(R.heilongjiangensis);全部嗜吞噬細(xì)胞無形體陽性標(biāo)本均屬同一種并與俄羅斯野鼠中檢測到該病原體同源性最高。
　　結(jié)論：
　　云南地區(qū)小獸類宿主攜帶巴爾通體、伯氏疏螺旋體、嗜吞噬細(xì)胞無形體和斑點(diǎn)熱群立克次體四種病原體,是該四種病原體的自然疫源地。除SFGR以外,不同的氣候類型、海拔、棲息環(huán)境以及小獸種屬下病原體