七氟烷對新生大鼠海馬組織端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶表達及神經(jīng)細胞凋亡的影響.pdf

1、目的：研究七氟烷對新生大鼠海馬組織端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(TERT)的影響，探討七氟烷導致神經(jīng)細胞凋亡與TERT表達的關系。
　　方法：出生后7天的SD大鼠40只隨機分為對照組(C組)20只、七氟烷吸入組（S組）20只。23℃室溫下，將對照組大鼠（C組）放入特制有機玻璃箱持續(xù)吸入純氧，氧流量2L/min。實驗組（S組）放入與對照組相同大小質(zhì)地的有機玻璃箱予2.3％七氟烷吸入（氧流量2L/min），箱底平鋪鈉石灰吸收呼出的二氧化碳。實驗過程

2、中持續(xù)觀察新生大鼠的皮膚色澤、呼吸頻率及呼吸動度、氧飽和度儀測量新生大鼠的脈搏氧飽和度和心率。持續(xù)監(jiān)測箱內(nèi)七氟烷MAC濃度和出氣端二氧化碳濃度。實驗過程中凡出現(xiàn)大鼠膚色發(fā)紺、呼吸微弱、脈搏氧飽和度低于96%、心率低于100次/分不計入結果。六小時后，記錄所有大鼠生命體征，選取合格（未出現(xiàn)發(fā)紺，脈搏氧飽和度96%以上，心率100次/分以上）的大鼠。最終，實驗組16只合格，對照組20只均合格。待新生大鼠蘇醒（大鼠自由活動，逃避反射恢復）后1

3、小時，活體1分鐘內(nèi)取出大鼠海馬組織。用蘇木精-伊紅染色法（HE染色）及原位末端脫氧核糖轉(zhuǎn)移酶標記法（TUNEL）觀察海馬神經(jīng)細胞凋亡情況，用免疫組織化學（IHC）以及實時熒光聚合酶鏈反應（Real-time PCR）分析海馬組織端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶蛋白質(zhì)與mRNA表達。
　　結果：1.HE染色顯示：對照組(C組)海馬細胞排列緊密，細胞核圓而大，核仁清晰胞漿豐富，著色均勻為藍紫色，細胞核為圓形或橢圓形，可見深染的核仁。而七氟烷吸入組（S組

4、）海馬神經(jīng)細胞排列紊亂，細胞形態(tài)不規(guī)則，細胞體積變小，可見核固縮現(xiàn)象，伴有空泡細胞形成。2. TUNEL顯示：與對照組(C組)神經(jīng)元凋亡數(shù)量（1.324±0.032）相比，七氟烷組（S組）海馬神經(jīng)元凋亡數(shù)量（11.408±2.357）顯著提高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。3.免疫組化結果顯示：與對照組(C組)TERT表達情況相比，七氟烷組（S組）TERT強陽性、陽性和弱陽性表達均較低，且差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。4. Re