七氟烷對(duì)新生大鼠海馬組織端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶表達(dá)及神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：研究七氟烷對(duì)新生大鼠海馬組織端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(TERT)的影響，探討七氟烷導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞凋亡與TERT表達(dá)的關(guān)系。
　　方法：出生后7天的SD大鼠40只隨機(jī)分為對(duì)照組(C組)20只、七氟烷吸入組（S組）20只。23℃室溫下，將對(duì)照組大鼠（C組）放入特制有機(jī)玻璃箱持續(xù)吸入純氧，氧流量2L/min。實(shí)驗(yàn)組（S組）放入與對(duì)照組相同大小質(zhì)地的有機(jī)玻璃箱予2.3％七氟烷吸入（氧流量2L/min），箱底平鋪鈉石灰吸收呼出的二氧化碳。實(shí)驗(yàn)過程

2、中持續(xù)觀察新生大鼠的皮膚色澤、呼吸頻率及呼吸動(dòng)度、氧飽和度儀測(cè)量新生大鼠的脈搏氧飽和度和心率。持續(xù)監(jiān)測(cè)箱內(nèi)七氟烷MAC濃度和出氣端二氧化碳濃度。實(shí)驗(yàn)過程中凡出現(xiàn)大鼠膚色發(fā)紺、呼吸微弱、脈搏氧飽和度低于96%、心率低于100次/分不計(jì)入結(jié)果。六小時(shí)后，記錄所有大鼠生命體征，選取合格（未出現(xiàn)發(fā)紺，脈搏氧飽和度96%以上，心率100次/分以上）的大鼠。最終，實(shí)驗(yàn)組16只合格，對(duì)照組20只均合格。待新生大鼠蘇醒（大鼠自由活動(dòng)，逃避反射恢復(fù)）后1

3、小時(shí)，活體1分鐘內(nèi)取出大鼠海馬組織。用蘇木精-伊紅染色法（HE染色）及原位末端脫氧核糖轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記法（TUNEL）觀察海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況，用免疫組織化學(xué)（IHC）以及實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng)（Real-time PCR）分析海馬組織端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶蛋白質(zhì)與mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果：1.HE染色顯示：對(duì)照組(C組)海馬細(xì)胞排列緊密，細(xì)胞核圓而大，核仁清晰胞漿豐富，著色均勻?yàn)樗{(lán)紫色，細(xì)胞核為圓形或橢圓形，可見深染的核仁。而七氟烷吸入組（S組

4、）海馬神經(jīng)細(xì)胞排列紊亂，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，細(xì)胞體積變小，可見核固縮現(xiàn)象，伴有空泡細(xì)胞形成。2. TUNEL顯示：與對(duì)照組(C組)神經(jīng)元凋亡數(shù)量（1.324±0.032）相比，七氟烷組（S組）海馬神經(jīng)元凋亡數(shù)量（11.408±2.357）顯著提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。3.免疫組化結(jié)果顯示：與對(duì)照組(C組)TERT表達(dá)情況相比，七氟烷組（S組）TERT強(qiáng)陽(yáng)性、陽(yáng)性和弱陽(yáng)性表達(dá)均較低，且差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。4. Re