PDTC干預(yù)下大鼠急性酒精性肝損傷中NF-kB作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：本研究通過(guò)短時(shí)期大量酒精灌胃的方法建立急性酒精性肝損傷動(dòng)物模型，同時(shí)給予腹腔注射NF-kB阻斷劑PDTC，探討在PDTC干預(yù)下大鼠急性酒精性肝損傷中NF-kB的作用機(jī)制及對(duì)炎性介質(zhì)表達(dá)的影響。
　　方法：
　　1. Wistar大鼠（清潔級(jí)）60只隨機(jī)分為三組，模型組、PDTC干預(yù)組和對(duì)照組。模型組給予55％酒精8g/kg.d，分二次灌胃，共14天，于第三天起再給予生理鹽水腹腔注射；PDTC干預(yù)組于酒精灌胃第三天起，于

2、酒精灌胃前30分鐘給予PDTC腹腔注射，50mg/kg.d，余操作同模型組；對(duì)照組給予等量的生理鹽水灌胃及腹腔注射。實(shí)驗(yàn)第7天和第14天末次灌胃及腹腔注射后12小時(shí)處死動(dòng)物,心臟采血分離血清，采血后立即取肝組織用10%中性福爾馬林固定。
　　2.利用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清ALT和AST值，用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法）檢測(cè)血清中NF-kB、TNF-α水平。肝組織常規(guī)石蠟包埋，切片做HE染色和免疫組化染色（SABC法），觀察肝組

3、織病理變化和NF-kB、TNF-α的表達(dá)和分布。
　　結(jié)果：
　　1.大鼠血清ALT、AST值比較：實(shí)驗(yàn)第7天和第14天，模型組與對(duì)照組和干預(yù)組與模型組比較血清ALT值和AST值均有明顯變化；模型組第7天與第14天比較血清ALT和AST值明顯升高。
　　2.病理學(xué)檢查：HE染色結(jié)果：實(shí)驗(yàn)第7天與第14天，對(duì)照組肝小葉結(jié)構(gòu)正常；第7天模型組肝細(xì)胞腫脹，中央靜脈周圍肝細(xì)胞可見(jiàn)大小不等的脂肪變性，部分處可見(jiàn)點(diǎn)狀壞死，炎癥細(xì)胞

4、浸潤(rùn)；第7天干預(yù)組肝細(xì)胞脂肪變性減輕，未見(jiàn)壞死，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減輕；第14天模型組肝細(xì)胞可見(jiàn)灶狀壞死，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)增多；第14天干預(yù)組偶見(jiàn)點(diǎn)狀壞死，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)增較模型組明顯減少。
　　3.免疫組化染色結(jié)果
　?。?） NF-kB主要在中央靜脈周圍肝細(xì)胞呈陽(yáng)性表達(dá)，實(shí)驗(yàn)第7天和第14天，模型組與對(duì)照組比較陽(yáng)性面積百分比明顯增高，干預(yù)組與模型組比較陽(yáng)性面積百分比明顯降低；模型組第14天與第7天比較面積百分比明顯增高。
　　

5、（2） TNF-α主要在中央靜脈周圍肝細(xì)胞呈陽(yáng)性表達(dá)，實(shí)驗(yàn)第7天和第14天，模型組與對(duì)照組比較陽(yáng)性面積百分比明顯增高；干預(yù)組與模型組比較陽(yáng)性面積百分比明顯降低；模型組第14天與第7天比較面積百分比明顯增高。
　?。?）肝組織中TNF-α的表達(dá)與NF-kB表達(dá)呈正相關(guān)。
　　4.大鼠血清NF-kB水平和TNF-α水平比較
　　（1）實(shí)驗(yàn)第7天和第14天，對(duì)照組與模型組和模型組與干預(yù)組比較血清NF-kB水平和血清TNF-α

6、水平均有明顯變化。實(shí)驗(yàn)第7天與第14天模型組比較血清NF-kB和TNF-α水平明顯升高。
　　（2）實(shí)驗(yàn)第7天和第14天，模型組血清NF-kB和TNF-α水平呈正相關(guān)。
　　結(jié)論：
　　1、在大鼠急性酒精性肝損傷中PDTC能有效阻斷NF-kB的活化；
　　2、在大鼠急性酒精性肝損傷中NF-kB和TNF-α在肝組織中的表達(dá)和血清中的含量都呈正相關(guān)關(guān)系；
　　3、 NF-kB可通過(guò)激活TNF-α在大鼠急性酒精性