下丘腦-垂體-甲狀腺軸細(xì)胞分子機(jī)制的季節(jié)變化與中醫(yī)腎本質(zhì)研究的探討.pdf

1、天人相應(yīng)學(xué)說是中醫(yī)理論體系的核心思想，它對中醫(yī)理論的陰陽、五行、藏象、氣血津液等有著重要的影響，尤其在藏象理論中，天人相應(yīng)學(xué)說更是通過季節(jié)氣候?qū)⑽迮K、六腑等與自然融為一體，形成了具有中醫(yī)特色的“五臟應(yīng)時”理論。然而目前對季節(jié)氣候如何通過人體對五臟發(fā)揮作用的機(jī)制研究還處在初始階段，所以如何運(yùn)用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)，以中醫(yī)天人相應(yīng)的整體思維模式為基礎(chǔ)，建立“五臟應(yīng)時”的實(shí)驗(yàn)研究是亟待解決的問題。 1．目的： 以中醫(yī)“腎應(yīng)冬”為“五臟

2、應(yīng)時”研究的突破口，以下丘腦一垂體一甲狀腺軸為主線，通過對其理論內(nèi)涵的剖析，提出與腎實(shí)質(zhì)密切相關(guān)的甲狀腺軸研究的可行性思路，并通過內(nèi)分泌激素水平、細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)水平的相關(guān)性實(shí)驗(yàn)研究，進(jìn)一步證實(shí)該思路的可行性與科學(xué)性，從而為中醫(yī)五臟的實(shí)質(zhì)研究開辟新的方向和領(lǐng)域。 2．方法： 2.1 理論研究： 本文采用文獻(xiàn)資料法和邏輯分析法，對中醫(yī)“五臟應(yīng)時”學(xué)說的中醫(yī)理論內(nèi)涵和神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)整體調(diào)節(jié)理論基礎(chǔ)進(jìn)行闡釋和分析，提出

3、中醫(yī)“五臟應(yīng)時”學(xué)說現(xiàn)代研究的可行性思路和途徑，并對其實(shí)驗(yàn)研究的切入點(diǎn)進(jìn)行探討。 2.2 實(shí)驗(yàn)研究： (1)總體設(shè)計：本實(shí)驗(yàn)研究主要以“下丘腦-垂體-甲狀腺軸”為主線，以對光強(qiáng)度極為敏感的松果腺為切入點(diǎn)，選擇了在細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中起重要作用的G蛋自和受體，以及內(nèi)分泌系統(tǒng)分泌并釋放的激素作為研究的對象，觀察在生理狀態(tài)下，大鼠冬夏季節(jié)下丘腦一垂體一甲狀腺軸相應(yīng)水平的G蛋白、TSH受體(MR)、TRH受體mRNA及促甲狀腺激素

4、釋放激素(TRH)、促甲狀腺激素刺激激素(TSH)、三碘甲狀腺氨酸(T<,3>)、四碘甲狀腺原氨酸(T<,4>)的變化。同時觀察松果腺在此過程中的高位調(diào)節(jié)作用。 (2)實(shí)驗(yàn)動物：SD大鼠，雄性，180—200 g/只。隨機(jī)分成生理組、手術(shù)組、偽手術(shù)組，每組8只。實(shí)驗(yàn)大鼠接受自然光照，自由攝取食水，室溫飼養(yǎng)(冬季室溫為17℃±2℃，夏季室溫為25℃±2℃)。在每年冬至、夏至目前一個月，手術(shù)組大鼠結(jié)扎矢狀竇并摘除松果腺，偽手術(shù)組大鼠

5、結(jié)扎矢狀竇但不摘除松果腺，生理組大鼠不做任何手術(shù)。所有實(shí)驗(yàn)大鼠將被飼養(yǎng)至冬至、夏至當(dāng)日晚九點(diǎn)，斷頭處死。 (3)檢測方法：G蛋白及TSH受體含量測定，運(yùn)用Western Blot；TRH、TSH、T<,3>、T<,4>測定，運(yùn)用放射免疫法；TRH受體mRNA，運(yùn)用RT—PCR法。 (4)分析方法：受體、G蛋白和TRH受體mRNA含量分析運(yùn)用AlphaImager TM圖像分析系統(tǒng)，所有數(shù)據(jù)將接受裂區(qū)設(shè)計的實(shí)驗(yàn)分析，該分析

6、將運(yùn)用SAS 8.02軟件進(jìn)行統(tǒng)計，并進(jìn)行q檢驗(yàn)。 3．結(jié)果 3.1 理論研究結(jié)果 (1)褪黑素在中醫(yī)基礎(chǔ)理論中發(fā)揮的作用非常關(guān)鍵，它是闡明中醫(yī)基礎(chǔ)理論中天人相應(yīng)的整體思想的關(guān)鍵所在，也是研究“時臟相應(yīng)”揭示五臟實(shí)質(zhì)的關(guān)鍵所在，更是研究節(jié)律提倡因時制宜的關(guān)鍵所在，具有不可替代的重要地位。 (2)西醫(yī)的神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)注重機(jī)體的整體功能調(diào)節(jié)，符合中醫(yī)“天人相應(yīng)”的整體思想，體現(xiàn)了中醫(yī)五臟的相生相克，制

7、化平衡的機(jī)制。它是闡明五臟之間相互關(guān)系的物質(zhì)基礎(chǔ)，也是闡明五臟本身的物質(zhì)基礎(chǔ)。 (3)以“五臟應(yīng)時"為理論依據(jù)，通過“時”這個節(jié)律性變化因素研究神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)，既可以保證該網(wǎng)絡(luò)體系研究的生理特性，又體現(xiàn)了其網(wǎng)絡(luò)體系的整體性和特殊性，其研究方法符合中醫(yī)的整體思想和以生理推斷五臟實(shí)質(zhì)的研究思路。 3.2 實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果 3.2.1 季節(jié)因素對下丘腦-垂體-甲狀腺軸的影響 (1)血清內(nèi)分泌激素：T<,3>

8、(P<0.01)、T<,4>(P<0.05)、TRH(P<0.05)三項(xiàng)指標(biāo)冬夏比較：冬高夏低，差異顯著；TSH含量冬夏比較沒有顯著性差異。 (2)受體水平：甲狀腺TSH受體含量冬夏比較：冬高夏低，差異顯著，P<0.05。 (3)基因水平：垂體TRH受體mRNA含量冬夏比較：冬高夏低，差異顯著，P<0.05。 (4)甲狀腺軸G蛋白：下丘腦Gi、垂體Gq兩項(xiàng)指標(biāo)冬夏比較：冬高夏低(P<0.05)，差異顯著；而甲狀腺

9、Gi和甲狀腺Gs冬夏比較沒有顯著差異。 3.2.2 手術(shù)因素對下丘腦-垂體-甲狀腺軸的影響 (1)血清內(nèi)分泌激素：SD大鼠血清T<,4>在冬至生理組和冬至手術(shù)組之間比較有顯著性差異，P<0.05；T<,3>、TSH、TRH在生理組、手術(shù)組及偽手術(shù)組間比較沒有顯著性差異。 (2)受體水平：TSH受體含量在在生理組、手術(shù)組及偽手術(shù)組間比較沒有顯著性差異。 (3)基因水平：TRH受體mRNA含量在生理組和手術(shù)組

10、之間比較有顯著性差異，P<0.05。 (4)甲狀腺軸G蛋白：下丘腦的Gi、甲狀腺的Gs蛋白在生理組和手術(shù)組之間比較都有顯著性差異，P<0.05；垂體的Gq蛋白在冬至生理組和冬至手術(shù)組之間比較有顯著性差異，P(0.05；甲狀腺的Gi蛋白在在生理組、手術(shù)組及偽手術(shù)組間比較沒有顯著性差異。 3.2.3 手術(shù)與季節(jié)的交互作用。 (1)血清內(nèi)分泌激素：SD大鼠血清T<,3>(P<0.05)、T4(P<0.05)、TSH(P

11、<0.01)三項(xiàng)指標(biāo)各自存在手術(shù)與季節(jié)的交互效應(yīng)，也就是說季節(jié)因素產(chǎn)生的差別，可因手術(shù)施加的程度而異。而血清TRH沒有手術(shù)與季節(jié)的交互效應(yīng)。 (2)受體水平：SD大鼠甲狀腺TSH受體含量沒有手術(shù)與季節(jié)的交互效應(yīng)。 (3)基因水平：SD大鼠垂體TRH受體mRNA含量沒有手術(shù)與季節(jié)的交互效應(yīng)。 (4)甲狀腺軸G蛋白：SD大鼠垂體Gq蛋白的含量存在手術(shù)與季節(jié)交互效應(yīng)(P<0.05)。而下丘腦Gi、甲狀腺Gs和Gi三項(xiàng)指

12、標(biāo)各自沒有手術(shù)與季節(jié)的交互效應(yīng)。 4．結(jié)論 (1)中醫(yī)“腎應(yīng)冬”調(diào)控機(jī)制與季節(jié)因素密切相關(guān)。 (2)中醫(yī)“腎應(yīng)冬”調(diào)控機(jī)制與松果體密切相關(guān)。 (3)從“五臟應(yīng)時”角度研究中醫(yī)臟象實(shí)質(zhì)的思路是可行的。 (4)本研究首次以季節(jié)變化為因素，以下丘腦-垂體-甲狀腺軸為主線，從整體角度深入研究細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制，并通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)中醫(yī)“腎應(yīng)冬”的規(guī)律與下丘腦一垂體一甲狀腺軸整體調(diào)節(jié)機(jī)制下的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)被激活密