HPLC在濃縮果汁及加工用助劑相關(guān)成分測定中的研究.pdf

1、多酚、氨基酸及有機(jī)酸等物質(zhì)作為評價果汁品質(zhì)、果汁質(zhì)量檢測及加工工藝技術(shù)控制指標(biāo)的重要化合物。目前我國對它們的檢測標(biāo)準(zhǔn)和方法尚不完善。同時,國內(nèi)關(guān)于果汁加工用酶制劑中苯甲酸和山梨酸的測定方法尚未見報道,也沒有果汁及加工用樹脂中苯乙烯和二乙烯苯測定方法的報道。在國際社會日益關(guān)注食品安全的今天,有必要對果汁中有機(jī)酸、氨基酸、多酚、果汁及樹脂中苯乙烯和二乙烯苯、酶制劑中苯甲酸和山梨酸的測定方法進(jìn)行研究,建立相關(guān)的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。HPLC分析具有分

2、離效率高、速度快、靈敏度高、樣品用量少、易于和其它儀器聯(lián)用、分離和測定一次完成等優(yōu)點(diǎn),是目前應(yīng)用最為廣泛的一種分析檢測技術(shù)。本論文分別利用HPLC、UPLC和UPLC-MS/MS技術(shù)開展對酶制劑中苯甲酸、山梨酸及濃縮果汁中有機(jī)酸、濃縮果汁及樹脂中的苯乙烯和二乙烯苯及濃縮果汁中多酚、游離氨基酸測定方法的研究。主要研究結(jié)果如下：(1)建立了測定酶制劑中苯甲酸和山梨酸的HPLC的方法。最佳條件為：以ACE5 C18為色譜柱,甲醇-0.02mo

3、l/LNH4Ac溶液(用HAc調(diào)pH至5.8)為流動相,DAD為檢測器,230nm為檢測波長。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：苯甲酸和山梨酸在1.00～2.50×102μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r≥0.999),平均回收率在92.3％～109%之間,RSD≤3.1%(n=6)。該法樣品處理簡單,提取液無需純化即可上機(jī)分析,僅需15min便可完成分析任務(wù)。(2)建立了同時測定濃縮果汁中11種有機(jī)酸的固相萃取-反相高效液相色譜(SPE-RP-HPLC)方

4、法。最佳條件為：以Aichrom BondAQ C18為色譜柱,甲醇-0.02mol/LNH4H2PO4(用H3PO4調(diào)pH至2.8)為流動相,210nm為檢測波長。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：有機(jī)酸濃度在(酒石酸4.80×10-2～4.80mg/mL、奎寧酸0.20～20.0mg/mL、蘋果酸0.10～10.0mg/mL莽草酸0.01～1.00mg/mL、抗壞血酸0.02～2.00mg/mL、乙酸0.40～40.0mg/mL、馬來酸0.01～1.0

5、0mg/mL、乳酸0.20～20.0mg/mL、琥珀酸0.20～20.0mg/mL、富馬酸4.00×10-3～0.40mg/mL、檸檬酸0.10～10.0mg/mL)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r≥0.9900),平均回收率在80.1%～95.5%之間,RSD≤6.0%(n=6)。該法減少了雜質(zhì)的干擾,改善了分析的效果。(3)建立了測定濃縮果汁及加工用樹脂中苯乙烯和二乙烯苯的UPLC方法。最佳條件為：以BEH C18為色譜柱,乙腈-水為流動相,

6、梯度洗脫,PDA為檢測器,240nm為檢測波長。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：苯乙烯和二乙烯苯在1.00～1.00×102μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9999)；果汁樣品中苯乙烯和二乙烯苯的平均回收率在81.4%～88.4%之間,RSD≤3.6%(n=6)；樹脂樣品中,其平均回收率在80.7%～90.7%之間,RSD≤3.7%(n=6)。該法樣品處理簡單,分析速度快,僅需4min便可完成分析任務(wù)。(4)建立了同時測定濃縮果汁中18種多酚化合物

7、的UPLC-MS/MS方法。最佳條件為：選擇Oasis MAX固相萃取小柱凈化,以BEH C18為色譜柱,甲醇-0.1%甲酸為流動相,梯度洗脫,采用電噴霧電離源掃描方式,多反應(yīng)監(jiān)測,負(fù)離子模式進(jìn)行檢測。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：多酚化合物濃度在(丁香酸、鞣花酸、槲皮素及反式肉桂酸為100～1.00×104ng/mL、其它的均為10.0～1.00×103ng/mL)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r≥0.9900),平均回收率在77.6%～119%之間,RSD≤

8、6.0%(n=6)。(5)建立了同時測定濃縮果汁中20種游離氨基酸的UPLC-MS/MS方法。最佳條件為：選擇異硫氰酸苯酯為衍生試劑,以BEH C18為色譜柱,乙腈-0.1%甲酸(含1mmol/L甲酸銨)為流動相,梯度洗脫,采用電噴霧電離源掃描方式,多反應(yīng)監(jiān)測,正離子模式進(jìn)行檢測。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：氨基酸濃度分別在(天門冬氨酸為50.0～1.00×103ng/mL、其它的均為10.0～1.00×103ng/mL)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r≥0.