皮膚及口腔黏膜無瘢痕創(chuàng)傷愈合中生長因子對成纖維細胞的影響及調(diào)節(jié)機制.pdf

1、目的：
　　研究皮膚及牙齦成纖維細胞在EGF、VEGF、bFGF、TGF-β1、TGF-β3這五種不同的細胞生長因子的濃度作用下，細胞增殖、遷移以及基因表達的異同，為實現(xiàn)軟組織無瘢痕創(chuàng)傷修復(fù)提供進一步的理論基礎(chǔ)。
　　材料和方法：
　　牙齦和皮膚標(biāo)本分別采集于華中科技大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院口腔醫(yī)學(xué)中心頜面外科門診和泌尿外科門診。其中，健康牙齦來自于牙拔除術(shù)或助萌手術(shù)；包皮組織來自于包皮切除術(shù)，患者年齡均不超過28周歲。無菌條

2、件下，用酶消化法分別原代培養(yǎng)人牙齦成纖維細胞和人皮膚成纖維細胞。取對數(shù)生長期細胞，通過劃痕實驗、Transwell小室實驗、CCK-8和 RT-qPCR等檢測方法，比較和驗證在不同因子的作用下，牙齦和皮膚成纖維細胞在遷移、增殖、及膠原表達等方面的異同，探求它們在組織創(chuàng)傷修復(fù)過程中的作用意義。
　　1.利用體外細胞劃痕實驗和Transwell小室實驗，分別在0 h、24 h、48 h考察EGF、bFGF、VEGF、TGF-β1、TG

3、F-β3這五種細胞生長因子對人牙齦、皮膚Fb遷移的影響。
　　2.采用細胞計數(shù)法、CCK-8增殖方法檢測不同濃度（0～100 ng/mL）的EGF、VEGF、bFGF、TGF-β1、TGF-β3這五種細胞生長因子在72 h時對人牙齦、皮膚Fb增殖的影響，并初步探討其機制。
　　3.采用RT-qPCR的方法檢測不同濃度（0～100 ng/mL）的EGF、VEGF、bFGF這三種細胞生長因子在6 d時對人牙齦、皮膚Fb細胞外基質(zhì)

4、（Collagen I、III和MMP-1、13）表達的影響。
　　結(jié)果：
　　1. EGF能促進牙齦、皮膚Fb增殖，對皮膚Fb增殖作用與濃度呈依賴關(guān)系，對牙齦Fb的影響則與濃度無關(guān)；在10 ng/ml濃度時，EGF對牙齦、皮膚Fb的遷移具有最佳的促進作用。
　　2. bFGF對皮膚Fb增殖作用相較牙齦Fb，有更明顯的促進作用；VEGF對牙齦、皮膚Fb的增殖均無顯著作用；同時，VEGF和bFGF對牙齦皮膚Fb的遷移表現(xiàn)

5、出有顯著性的促進作用，其中在20 ng/ml濃度下效果最佳。
　　3. TGF-β1、TGF-β3對皮膚Fb遷移和增殖均有明顯促進作用；TGF-β1在低濃度（1 ng/ml）時對牙齦Fb的增殖表現(xiàn)出促進作用，但是隨濃度增高則表現(xiàn)出抑制作用，TGF-β3對牙齦Fb增殖的促進作用與濃度呈正相關(guān)性。
　　4.膠原分泌方面，牙齦和皮膚Fb在不同濃度的EGF、bFGF、VEGF刺激下，細胞中Collagen I、III和MMP-1、1