α-干擾素對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞生物學(xué)行為和B7-H4分子表達(dá)的影響.pdf

1、[目的]
　　 肺癌是嚴(yán)重危害人類健康的疾病。干擾素（Interferon，IFN）作為目前研究最多、唯一具有抗病毒和抗腫瘤雙重作用的生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑，越來(lái)越受到重視。干擾素（IFN）在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、凋亡中起著十分重要的作用，但α-干擾素（IFN-α）對(duì)肺癌細(xì)胞的作用及其具體機(jī)制尚未十分明確。已經(jīng)明確共刺激分子B7分子家族在腫瘤的增殖和凋亡中具有一定的作用，B7-H4（又稱B7sl和B7x）是B7家族中的最新發(fā)現(xiàn)的一個(gè)新成員，

2、目前認(rèn)為B7-H4能通過(guò)抑制T細(xì)胞的增殖、細(xì)胞因子（如IL-2、4、10、IFN-γ等）分泌和細(xì)胞周期的進(jìn)程來(lái)負(fù)性調(diào)控T細(xì)胞的免疫應(yīng)答，提高腫瘤組織對(duì)T細(xì)胞攻擊的抵抗力，從而使腫瘤細(xì)胞最終能逃逸機(jī)體的免疫監(jiān)視，但其在細(xì)胞內(nèi)相關(guān)信號(hào)通路及調(diào)控因素尚待深入研究。本實(shí)驗(yàn)中，我們擬通過(guò)體外細(xì)胞培養(yǎng)的方法來(lái)探討IFN-α對(duì)人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549增殖、克隆形成、遷移和侵襲能力以及凋亡水平的影響，旨在探討α-干擾素對(duì)肺腺痛的抗癌作用，同時(shí)研究IFN-

3、α對(duì)肺腺癌細(xì)胞B7-H4分子表達(dá)的影響，為今后進(jìn)一步研究B7-H4表達(dá)調(diào)控因素，抑制B7-H4的表達(dá)對(duì)非小細(xì)胞肺癌的生物學(xué)行為和刺激特異性免疫反應(yīng)的影響，進(jìn)而研究B7-H4在細(xì)胞內(nèi)相關(guān)信號(hào)通路，為腫瘤免疫干預(yù)提供新的思路。
　　 [材料和方法]
　　 1.應(yīng)用MTT法檢測(cè)IFN-α對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞處理前后細(xì)胞增殖活性；觀察并比較IFN-α對(duì)細(xì)胞增殖活性的影響。
　　 2.應(yīng)用平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)IFN-α對(duì)

4、人肺腺癌A549細(xì)胞處理前后細(xì)胞克隆形成能力；觀察并比較IFN-α對(duì)細(xì)胞克隆形成能力的影響。
　　 3.應(yīng)用Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)IFN-α對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞處理前后細(xì)胞遷移能力和侵襲能力；觀察并比較IFN-α對(duì)細(xì)胞遷移能力和侵襲能力的影響。
　　 4.應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)IFN-α對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞處理前后細(xì)胞凋亡水平；觀察并比較IFN-α對(duì)細(xì)胞凋亡水平的影響。
　　 5.應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)

5、IFN-α對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞處理前后細(xì)胞B7-H4 mRNA表達(dá)；觀察并比較IFN-α對(duì)細(xì)胞B7-H4 mRNA表達(dá)的影響。
　　 6.應(yīng)用Western-blot技術(shù)檢測(cè)IFN-α對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞處理前后細(xì)胞B7-H4蛋白表達(dá)；觀察并比較IFN-α對(duì)細(xì)胞B7-H4蛋白表達(dá)的影響。
　　 [結(jié)果]
　　 1.MTT結(jié)果顯示：IFN-α處理A549細(xì)胞后，同一時(shí)間隨著濃度的增加或者同一種濃度隨著時(shí)間的延長(zhǎng)

6、，細(xì)胞增殖能力逐漸降低。提示IFN-α可呈時(shí)間和濃度依賴性地抑制A549細(xì)胞的增殖能力（P<0.05）。
　　 2.平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示：IFN-α處理A549細(xì)胞后，細(xì)胞克隆形成能力均不同程度地降低。隨著藥物濃度的增加，A549細(xì)胞克隆形成能力逐漸降低。提示IFN-α可呈濃度依賴性地抑制A549細(xì)胞克隆形成能力（P<0.05）。
　　 3.Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示：IFN-α處理A549細(xì)胞后，穿

7、過(guò)基底膜的細(xì)胞數(shù)均不同程度地降低。隨著藥物濃度的增加，A549細(xì)胞遷移和侵襲能力逐漸降低。提示IFN-α可呈濃度依賴性地抑制A549細(xì)胞遷移和侵襲能力（P<0.05）。
　　 4.細(xì)胞凋亡水平檢測(cè)結(jié)果顯示：IFN-α處理A549細(xì)胞后，細(xì)胞的凋亡水平均不同程度地升高。隨著藥物濃度的增加，A549細(xì)胞凋亡水平逐漸升高。提示IFN-α可呈濃度依賴性地促進(jìn)細(xì)胞凋亡（P<0.05）。
　　 5.RT-PCR技術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示：IF

8、N-α處理A549細(xì)胞后，A549細(xì)胞B7-H4 mRNA表達(dá)與β-actin條帶灰度比值均不同程度地升高。隨著藥物濃度的增加，A549細(xì)胞B7-H4 mRNA表達(dá)與β-actin條帶灰度比值逐漸升高，A549細(xì)胞B7-H4 mRNA表達(dá)水平逐漸升高。提示IFN-α可呈濃度依賴性地增加細(xì)胞B7-H4 mRNA表達(dá)（P<0.05）。
　　 6.Western-blot技術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示：IFN-α處理A549細(xì)胞后，A549細(xì)胞B7

9、-H4蛋白表達(dá)與α-tubulin條帶灰度比值均不同程度地升高。隨著藥物濃度的增加，A549細(xì)胞B7-H4蛋白表達(dá)與α-tubulin條帶灰度比值逐漸升高，A549細(xì)胞B7-H4蛋白表達(dá)水平逐漸升高。提示IFN-α可呈濃度依賴性地增加細(xì)胞B7-H4蛋白表達(dá)（P<0.05）。
　　 [結(jié)論]
　　 1.IFN-α可呈濃度依賴性地降低人肺腺癌A549細(xì)胞的增殖水平、克隆形成、遷移和侵襲能力，誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡。
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