α-干擾素對人肺腺癌A549細胞生物學行為和B7-H4分子表達的影響.pdf

1、[目的]
　　 肺癌是嚴重危害人類健康的疾病。干擾素（Interferon，IFN）作為目前研究最多、唯一具有抗病毒和抗腫瘤雙重作用的生物反應調(diào)節(jié)劑，越來越受到重視。干擾素（IFN）在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、凋亡中起著十分重要的作用，但α-干擾素（IFN-α）對肺癌細胞的作用及其具體機制尚未十分明確。已經(jīng)明確共刺激分子B7分子家族在腫瘤的增殖和凋亡中具有一定的作用，B7-H4（又稱B7sl和B7x）是B7家族中的最新發(fā)現(xiàn)的一個新成員，

2、目前認為B7-H4能通過抑制T細胞的增殖、細胞因子（如IL-2、4、10、IFN-γ等）分泌和細胞周期的進程來負性調(diào)控T細胞的免疫應答，提高腫瘤組織對T細胞攻擊的抵抗力，從而使腫瘤細胞最終能逃逸機體的免疫監(jiān)視，但其在細胞內(nèi)相關信號通路及調(diào)控因素尚待深入研究。本實驗中，我們擬通過體外細胞培養(yǎng)的方法來探討IFN-α對人肺腺癌細胞系A549增殖、克隆形成、遷移和侵襲能力以及凋亡水平的影響，旨在探討α-干擾素對肺腺痛的抗癌作用，同時研究IFN-

3、α對肺腺癌細胞B7-H4分子表達的影響，為今后進一步研究B7-H4表達調(diào)控因素，抑制B7-H4的表達對非小細胞肺癌的生物學行為和刺激特異性免疫反應的影響，進而研究B7-H4在細胞內(nèi)相關信號通路，為腫瘤免疫干預提供新的思路。
　　 [材料和方法]
　　 1.應用MTT法檢測IFN-α對人肺腺癌A549細胞處理前后細胞增殖活性；觀察并比較IFN-α對細胞增殖活性的影響。
　　 2.應用平板克隆形成實驗檢測IFN-α對

4、人肺腺癌A549細胞處理前后細胞克隆形成能力；觀察并比較IFN-α對細胞克隆形成能力的影響。
　　 3.應用Transwell小室實驗檢測IFN-α對人肺腺癌A549細胞處理前后細胞遷移能力和侵襲能力；觀察并比較IFN-α對細胞遷移能力和侵襲能力的影響。
　　 4.應用流式細胞儀檢測IFN-α對人肺腺癌A549細胞處理前后細胞凋亡水平；觀察并比較IFN-α對細胞凋亡水平的影響。
　　 5.應用RT-PCR技術檢測

5、IFN-α對人肺腺癌A549細胞處理前后細胞B7-H4 mRNA表達；觀察并比較IFN-α對細胞B7-H4 mRNA表達的影響。
　　 6.應用Western-blot技術檢測IFN-α對人肺腺癌A549細胞處理前后細胞B7-H4蛋白表達；觀察并比較IFN-α對細胞B7-H4蛋白表達的影響。
　　 [結(jié)果]
　　 1.MTT結(jié)果顯示：IFN-α處理A549細胞后，同一時間隨著濃度的增加或者同一種濃度隨著時間的延長

6、，細胞增殖能力逐漸降低。提示IFN-α可呈時間和濃度依賴性地抑制A549細胞的增殖能力（P<0.05）。
　　 2.平板克隆形成實驗檢測結(jié)果顯示：IFN-α處理A549細胞后，細胞克隆形成能力均不同程度地降低。隨著藥物濃度的增加，A549細胞克隆形成能力逐漸降低。提示IFN-α可呈濃度依賴性地抑制A549細胞克隆形成能力（P<0.05）。
　　 3.Transwell小室實驗檢測結(jié)果顯示：IFN-α處理A549細胞后，穿

7、過基底膜的細胞數(shù)均不同程度地降低。隨著藥物濃度的增加，A549細胞遷移和侵襲能力逐漸降低。提示IFN-α可呈濃度依賴性地抑制A549細胞遷移和侵襲能力（P<0.05）。
　　 4.細胞凋亡水平檢測結(jié)果顯示：IFN-α處理A549細胞后，細胞的凋亡水平均不同程度地升高。隨著藥物濃度的增加，A549細胞凋亡水平逐漸升高。提示IFN-α可呈濃度依賴性地促進細胞凋亡（P<0.05）。
　　 5.RT-PCR技術檢測結(jié)果顯示：IF

8、N-α處理A549細胞后，A549細胞B7-H4 mRNA表達與β-actin條帶灰度比值均不同程度地升高。隨著藥物濃度的增加，A549細胞B7-H4 mRNA表達與β-actin條帶灰度比值逐漸升高，A549細胞B7-H4 mRNA表達水平逐漸升高。提示IFN-α可呈濃度依賴性地增加細胞B7-H4 mRNA表達（P<0.05）。
　　 6.Western-blot技術檢測結(jié)果顯示：IFN-α處理A549細胞后，A549細胞B7

9、-H4蛋白表達與α-tubulin條帶灰度比值均不同程度地升高。隨著藥物濃度的增加，A549細胞B7-H4蛋白表達與α-tubulin條帶灰度比值逐漸升高，A549細胞B7-H4蛋白表達水平逐漸升高。提示IFN-α可呈濃度依賴性地增加細胞B7-H4蛋白表達（P<0.05）。
　　 [結(jié)論]
　　 1.IFN-α可呈濃度依賴性地降低人肺腺癌A549細胞的增殖水平、克隆形成、遷移和侵襲能力，誘導細胞的凋亡。
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