云南惡性瘧原蟲雙氫青蒿素抗性克隆株的篩選.pdf

1、1、目的 運用體外培養(yǎng)法對惡性瘧原蟲抗雙氫青蒿素蟲株進行體外連續(xù)培養(yǎng)，待其達到適宜感染率后進行同步化處理，然后利用有限稀釋法對蟲株進行有限稀釋并體外克隆，采用體外微量測定法對克隆蟲株的雙氫青蒿素、青蒿素、氯喹的體外敏感性的生物學特性進行鑒定，篩選并建立云南省惡性瘧原蟲抗雙氫青蒿素蟲株的克隆品系，為惡性瘧原蟲青蒿素類抗瘧藥抗藥性研究奠定基礎(chǔ)。 2、方法 （1）惡性瘧原蟲體外連續(xù)培養(yǎng)：Trager瘧原蟲體外培養(yǎng)法將惡

2、性瘧原蟲抗雙氫青蒿素蟲株進行連續(xù)培養(yǎng)。 （2）有限稀釋：采用有限稀釋法對正在培養(yǎng)的惡性瘧原蟲抗性株進行四次稀釋、一步處理，即每次稀釋以50%“O”型人紅細胞懸液1ml稀釋上一稀釋度的原蟲血，取最后稀釋濃度的含蟲血22ul，加50%新鮮“O”型人紅細胞懸液、1640完全培養(yǎng)液將其調(diào)整為含1%壓積紅細胞、每100ul含0．2蟲的含蟲血，按每孔0．2蟲加樣于96孔微量細胞培養(yǎng)板，放入37℃、5%CO2的蠟燭缸中培養(yǎng)，進行原蟲體外克隆。