IL-4誘導(dǎo)下依賴于Cdkn2a產(chǎn)生的IL-10分泌性CD8+T細(xì)胞的研究.pdf

1、CD8+T細(xì)胞在機體應(yīng)對腫瘤細(xì)胞、病毒感染以及胞內(nèi)病原體感染所進行的免疫調(diào)節(jié)和有效的免疫應(yīng)答過程中發(fā)揮著重要功能。初始CD8+T細(xì)胞經(jīng)過活化后可以分化為CD8+效應(yīng)性T細(xì)胞或CD8+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞。與CD4+T細(xì)胞相似，根據(jù)細(xì)胞分化條件不同、起調(diào)控作用的轉(zhuǎn)錄因子不同以及特異性產(chǎn)生細(xì)胞因子的差異，CD8+T細(xì)胞可以分為Tc1、Tc2、Tc9、Tc17等不同的效應(yīng)性T細(xì)胞亞群以及CD8+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞亞群(CD8+ Treg)。研究表明，具有免

2、疫調(diào)節(jié)功能的CD8+T細(xì)胞類型很多，例如CD8+CD28-、CD8+CD122+以及Qa-1限制性CD8+T細(xì)胞等，這些細(xì)胞統(tǒng)稱為CD8+ Treg。CD8+ Treg細(xì)胞在腫瘤免疫、移植免疫以及自身免疫中發(fā)揮著重要的免疫調(diào)節(jié)作用，對機體免疫系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)的維持意義重大。
　　本課題利用Tiger(IL-10/GFP)和10BiT(IL-10/Thy1.1)兩種IL-10轉(zhuǎn)基因報告小鼠，通過特定的細(xì)胞培養(yǎng)體系誘導(dǎo)出了一群IL-10分泌性

3、CD8+T細(xì)胞。我們主要圍繞細(xì)胞分化及調(diào)控機制、生物學(xué)特性以及生物學(xué)功能等幾方面對該群細(xì)胞進行了研究。
　　1.通過對細(xì)胞分化條件的研究，證實細(xì)胞因子IL-4是促進CD8+T細(xì)胞分化為IL-10分泌性細(xì)胞的關(guān)鍵因子，且該細(xì)胞中IL-10的表達(dá)并不依賴于內(nèi)源性的IFN-γ;
　　2.利用流式細(xì)胞染色以及實時熒光定量PCR的方法對該IL-10分泌性CD8+T細(xì)胞的生物學(xué)性質(zhì)進行了分析。流式染色結(jié)果表明，與相同培養(yǎng)條件下產(chǎn)生的IL

4、-10-CD8+T細(xì)胞相比，該群細(xì)胞高水平表達(dá)CD25、CD44以及CD69，因而表現(xiàn)出相對活化的表型特征;此外，細(xì)胞表面還高表達(dá)IL-7R以及IL-15R，說明其具有較強的存活能力。實時熒光定量PCR結(jié)果則表明這群IL-10分泌性CD8+T細(xì)胞表達(dá)一系列Tc2類細(xì)胞因子(IL-4，IL-5)，顆粒酶，穿孔素以及細(xì)胞周期調(diào)控因子Cdkn2a;
　　3.通過對CD8+T細(xì)胞中IL-10表達(dá)調(diào)控機制的研究，首次發(fā)現(xiàn)Cdkn2a能夠調(diào)控

5、IL-10的表達(dá)。首先，利用siRNA下調(diào)cdkn2a會導(dǎo)致IL-4誘導(dǎo)的IL-10表達(dá)水平明顯降低。其次，與WT CD8+T細(xì)胞相比，來源于Cdkn2a-/-小鼠的CD8+T細(xì)胞表達(dá)IL-10的水平明顯下降。研究證實，Cdkn2a對于IL-10表達(dá)的影響只局限于CD8+T細(xì)胞，其不影響CD4+T細(xì)胞以及抗原呈遞細(xì)胞中IL-10的表達(dá);
　　4.通過對這群IL-10分泌性CD8+T細(xì)胞進行體內(nèi)外生物學(xué)功能的研究，發(fā)現(xiàn)其在體外能以依

6、賴于IL-10和細(xì)胞接觸的方式顯著性抑制CD4+T細(xì)胞的增殖;此外，當(dāng)給TNBS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎小鼠眼靜脈輸入該群細(xì)胞時能夠?qū)е滦∈笱装Y減輕，其在該模型中可能通過抑制炎癥部位的Th1反應(yīng)來發(fā)揮保護作用，表明該群IL-10分泌性CD8+T細(xì)胞在機體內(nèi)發(fā)揮著重要的免疫調(diào)節(jié)功能。
　　綜上所述，本研究中我們定義了一群在IL-4誘導(dǎo)下依賴于Cdkn2a產(chǎn)生的IL-10分泌性CD8+T細(xì)胞，并對其生物學(xué)性質(zhì)及功能進行了深入探討。該項研究有助于我