激光共聚焦內(nèi)窺鏡對大鼠急性胰腺炎微循環(huán)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景和目的：急性胰腺炎(AP)為臨床常見多發(fā)疾病，其中約10％的病人可發(fā)展為重癥急性胰腺炎(severeacutepancreatits，SAP)，其轉(zhuǎn)化過程和發(fā)生機(jī)制十分復(fù)雜，現(xiàn)在比較公認(rèn)的有以下幾大學(xué)說：1.胰酶消化學(xué)說；2.細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)學(xué)說；3.微循環(huán)障礙學(xué)說；4.感染第二次打擊學(xué)說；5.白細(xì)胞過渡激活學(xué)說。近年來，胰腺微循環(huán)障礙在AP發(fā)生發(fā)展中的作用越來越受到重視，因?yàn)橐认傥⒀h(huán)與胰腺的生理、病理生理密切相關(guān)，它涉及到AP

2、以及休克所致胰腺損害的病理過程、胰腺內(nèi)分泌機(jī)能的自身調(diào)節(jié)以及胰腺內(nèi)外分泌部之間的機(jī)能聯(lián)系。隨實(shí)驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展和對AP病理生理的認(rèn)識，人們觀察到胰腺的出血壞死并非完全因?yàn)橐让傅慕M織溶解作用，其中以缺血為特征的胰腺微循環(huán)障礙顯得較為突出。胰腺的出血壞死是因?yàn)橐让傅闹苯幼饔?，還是胰腺微循環(huán)障礙，以及胰腺微循環(huán)障礙的始動因子是什么等等問題，已經(jīng)成為該領(lǐng)域中深入探索的課題。共聚焦激光內(nèi)窺鏡(CLE_)是在傳統(tǒng)的電子內(nèi)鏡基礎(chǔ)上整合了共聚焦激光顯微鏡而

3、成，具有放大1000倍的能力，現(xiàn)有研究主要用于診斷消化道早期腫瘤，結(jié)果提示具有較高敏感性和陽性率。根據(jù)CLE的性能特點(diǎn)，我們將其用于對活體大鼠胰腺微循環(huán)的研究，通過觀察大鼠胰腺微循環(huán)及AP時隨炎癥不同時期胰腺器官的微循環(huán)改變情況，以了解共聚焦激光內(nèi)窺鏡的性能，初步評價該設(shè)備在急性胰腺炎臨床和實(shí)驗(yàn)研究的應(yīng)用前景，希望為胰腺微循環(huán)的研究開拓新的方法。 方法：32只成年SD大鼠隨機(jī)分組為正常對照組和實(shí)驗(yàn)組。正常對照組8只，進(jìn)腹后僅對腹

4、部臟器作相應(yīng)翻動，找出胃、十二指腸、胰腺后，充分暴露胰腺，找到下腔靜脈采血后按照4ml/kg注射0.5％熒光素鈉，注射完畢時以CLE的頭端觀察窗孔緊貼大鼠胰腺組織，觀察到微循環(huán)結(jié)構(gòu)時采集圖像并記錄；實(shí)驗(yàn)組24只又分為12h組、24h組、48h組，進(jìn)腹找到胰腺，然后找到膽總管，以“0”號絲線結(jié)扎膽總管末端制作AP模型，分別在AP模型制作完成后12h(8只)、24h(8只)、48b(8只)再次開腹，先肉眼觀察腹腔及胰腺病變情況，找到下腔靜脈

5、采血后注射0.5％熒光素鈉4ml/kg，注射完畢時以CLE(同對照組方式)觀察病變胰腺組織，采集圖像并記錄。各組均取胰腺組織作病理切片。獲得胰腺微循環(huán)共聚焦的圖像后對其進(jìn)行分析，并參照相對應(yīng)的病理圖片進(jìn)行比較分析得出結(jié)論。 結(jié)果：①應(yīng)用結(jié)扎膽總管末端的方法，我們復(fù)制了AP動物模型，經(jīng)血清學(xué)檢測與組織學(xué)觀察證實(shí)其中部分為SAP模型；②應(yīng)用CLE可以觀察到正常的胰腺腺泡結(jié)構(gòu)，胰腺微循環(huán)結(jié)構(gòu)清晰可見，能夠分辨出毛細(xì)血管以及血管中流動的

6、紅細(xì)胞，并有可能對通過某一毛細(xì)血管橫切面的紅細(xì)胞個數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)，腺泡結(jié)構(gòu)較微循環(huán)的顯影效果差；③應(yīng)用CLE對實(shí)驗(yàn)組觀察顯示：12小時組腺泡結(jié)構(gòu)未見明顯改變，微循環(huán)毛細(xì)血管內(nèi)可見紅細(xì)胞流動但流速明顯減慢，微循環(huán)顯影效果較正常組差，但結(jié)構(gòu)與正常組比較無明顯差異；24小時組大部分腺泡結(jié)構(gòu)顯影模糊，但經(jīng)過仔細(xì)尋找后仍可見結(jié)構(gòu)基本正常的腺泡，能夠觀察到的完整的微循環(huán)結(jié)構(gòu)較12h組明顯減少，被觀察到的毛細(xì)血管內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)量明顯減少且流速較12h組慢；4

7、8小時組腺泡顯影模糊，成片的腺泡不顯影，幾乎觀察不到正常的腺泡結(jié)構(gòu)，很難找到完整的微循環(huán)結(jié)構(gòu)，極少能夠觀察到毛細(xì)血管，且血管內(nèi)罕見紅細(xì)胞，幾乎無紅細(xì)胞流動。④CLE未能觀察到確切的胰島組織，難以辨識白細(xì)胞，不能判斷是否有微血栓形成。 結(jié)論：①本研究結(jié)果證實(shí)CLE對胰腺微循環(huán)研究有較大價值，特別是對活體AP微循環(huán)血流狀態(tài)的判斷較以往實(shí)驗(yàn)方法具明顯優(yōu)勢；②CLE對某些組織和血液細(xì)胞的分辨能力不足，為疾病的診斷帶來困難；③目前CLE所