姜黃素對大鼠重癥急性胰腺炎防治作用的實驗研究.pdf

1、目的:觀察姜黃素對大鼠重癥急性胰腺炎(Severe acute panereatitis,SAP)干預(yù)后不同時間點的腹水量、血清淀粉酶(Amylase,AMY)、腫瘤壞死因子(Tumor Necrosis Factor-a,TNF-a)、白介素-6(Interleukin-6,IL-6)水平的變化;觀察胰腺組織大體形態(tài)和病理改變、Toll樣受體4(Toll like reeeptor4, TLR4)和核因子-κB(Nuclear Fac

2、tor-κB,NF-κB)表達水的變化以探討TLR4-NF-κB在SAP大鼠中的信號通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)機制,進一步揭示姜黃素在大鼠SAP中的防治作用。方法:SD雌性大鼠54只,體重約180-250g,隨機分為正常組(N組)、模型組(M組)、姜黃素預(yù)處理組(C組),各組按照3h、6h、12h分為3個亞組,每組6只。N組采取開腹后不經(jīng)胰膽管推注牛磺膽酸鈉而僅翻動十二指腸及胰腺組織后關(guān)腹;M組用5％的?；悄懰徕c按1.0ml/kg逆行胰膽管推注誘導(dǎo)SA

3、P;C組造模前2h用姜黃素100mg/Kg于腹腔注射;N組和M組動物分別于術(shù)前2小時腹腔注射40％丙二醇溶液1ml/100g.分別于3h、6h、12h三個時間點處死大鼠,測定腹水量;采用全自動生化分析儀測定大鼠血清AMY;ELISA法檢測血清TNF-a、IL-6、IL-10的含量,光鏡下觀察胰腺組織病理改變,用免疫組化(Envision二步法)檢測TLR4和NF-κB蛋白的表達水平。所有結(jié)果均用SAS8.0軟件分析。結(jié)果:①血清AMY:

4、N組AMY水平較低,M組于造模后3h開始升高,隨時間而遞增,以6h升高為著。M組血清AMY較N組、C組明顯升高(P<0.01,P<0.05);②M組、C組與 N組相比血清 IL-6、TNF-a均明顯升高(P<0.05),且以6h升高為明顯; C組IL-6、TNF-a水平較M組明顯下降(P<0.05)。③胰腺組織的病理學(xué)改變及評分:N組胰腺組織病理學(xué)改變未見明顯異常,僅見輕微充血水腫,個別炎性細胞浸潤。M組各時間點胰腺小葉結(jié)構(gòu)不均,小葉間

5、隔明顯增大,腺體組織充血、水腫、出血、壞死、炎性細胞浸潤均清晰可見,胰管上皮細胞脫落及嗜酸性變,小葉缺失。隨著時間的推移,炎癥加重,以12h時最明顯;C組胰腺組織在充血、壞死及炎癥細胞浸潤方面均較M組為輕,但仍可見壞死灶、胰管上皮的脫落及嗜酸性變。C組與M組同時間點相比病變程度減輕。N組的Schimdt評分值各時間點均無顯著性差異(P>0.05)。M組、C組各時間點的Schimdt評分均明顯高于N組(P<0.01)。隨著時間的推移,M組

6、的評分值逐漸上升,12h時達高峰;C組各時間點的評分值明顯低于 M組(P<0.05)。④胰腺組織TLR4、NF-κB的表達:N組的TLR4、NF-κB蛋白表達活性很低,M組大鼠各時間點的胰腺組織NF-κB、TLR4的陽性表達水平較N組和C組明顯增加(P<0.05),且隨時間的延長而增加,造模成功后3h內(nèi)即有TLR4蛋白表達,在12h處于高峰。C組各時間點胰腺組織NF-κB、TLR4蛋白的陽性表達較M組有所下降(P<0.05);而TLR4

7、與NF-κB的表達相平行。C組各時間點陽性細胞表達明顯低于M組(P<0.05),且各組NF-κB、TLR4蛋白水平的變化與形態(tài)學(xué)改變基本一致。結(jié)論:1.本實驗采用逆行胰膽管推注?；悄懰徕c成功構(gòu)建了SAP大鼠模型。2.TLR4、NF-κB在大鼠重癥急性胰腺炎胰腺組織中表達增強,提示了TLR4/NF-κB信號通路的激活參與了SAP的發(fā)生發(fā)展,與SAP的發(fā)病機制密切相關(guān),可能是發(fā)生胰腺出血壞死及重癥胰腺炎發(fā)生的的重要機制之一。3.姜黃素能在一