鱷龜抗菌肽的分離純化和抗菌效果研究.pdf

1、抗菌肽是近年來研究發(fā)現(xiàn)的新一代抗菌劑，對生物體免疫有重要作用。但爬行動物的相關研究還未見報道。本文初步研究鱷龜腸道、血液、肝臟和皮膚組織粗提物的抗菌活性，在此基礎上進一步研究了鱷龜血液抗菌肽的分離純化過程及其相關性質。研究包括四個試驗。 試驗一、鱷龜不同部位抗菌物質的初提 本實驗采用硫酸銨提取法和改進的乙酸提取法兩種不同的方法從誘導后的稚鱷龜腸道、血液、肝和皮膚組織內分離抗菌肽，研究鱷龜體內產生抗菌肽的能力及抗菌效果。其

2、中乙酸浸提法成功分離出具有抗菌活性的抗菌肽粗提物。用嗜水氣單胞菌和沙門氏菌為指示菌，結果顯示血液和腸提取物的抗菌效果明顯，腸提取物的抗菌圈大于血液提取物的抗菌圈，但肝和皮膚組織的提取物未觀察到抗菌圈。由此可見，抗菌物質在血液和腸組織中含量較多，在皮膚和肝臟中抗菌成分的含量比較少。 試驗二、誘導劑量對幼鱷龜血液抗菌活性物的影響 將鱷龜隨機分成四組，每組4只。第一組，注射0.5ml生理鹽水；第二、三、四組分別腹腔注射滅活致病

3、性嗜水氣單胞菌1×109個/ml菌液0.1ml/只，0.3ml/只，0.5ml/只；各組分別在誘導后12h尾靜脈采血。本研究采用改進的Tris-HCl緩沖液提取鱷魚龜血液抗菌肽類物質，第一組、第二組、第三組和第四組的粗制品對大腸桿菌、沙門氏菌、嗜水氣單胞菌的殺菌率分別為41.7％，56.7％，63.0％和68.8％；53.3％，61.5％，78.0％和88.9％；56.1，67.5％，83.9％和98.1％。但鱷龜血液粗制品對3株菌的抑

4、菌圈不明顯。由此可見，誘導組比對照組效果好，且殺菌效果隨誘導劑量的增加而提高。抗菌肽粗制品經(jīng)過PAGE電泳后，可見高劑量組電泳條帶顏色明顯比低劑量組深，說明高劑量誘導組的蛋白質含量比底劑量組高。 試驗三、鱷龜血液抗菌肽的分離純化 本研究采用SephadexG-50凝膠柱過濾層析鱷龜血液抗菌肽，層析柱規(guī)格為2.6×100cm，洗脫液為0.5％的甲醇，流速為0.5ml/min，1管/10min。分離純化效果比較理想，峰之間區(qū)

5、分得非常明顯，其活性峰為Ⅳ峰的26-30管，其中第28管的抗菌活性最強。聚丙烯酞胺凝膠電泳和SDS-聚丙烯酞胺凝膠電泳結果表明，電泳圖譜均為單一條帶，說明分離的鱷龜血液抗菌肽已經(jīng)達到電泳純，其分子量約為6000Da-8000Da。 試驗四、鱷龜血液抗菌肽抗菌譜的測定及性質研究 研究顯示，分離純化的血液抗菌肽對G-細菌和G+細菌均有不同程度的抑制或殺滅作用，但不同的微生物對其敏感性不同。其對致病性嗜水氣單胞菌、葡萄球菌、枯