外源性龍血素B和鈉通道調制劑對胞內鈣濃度的動態(tài)調制.pdf

1、本論文采用鈣離子熒光成像技術，免疫印跡以及行為學的方法，分別對龍血素B引起大鼠背根神經節(jié)（DRG）細胞內鈣離子上升的機制和東亞鉗蝎毒素(BmK)對于大鼠腦突觸體膜內鈣離子變化的協同作用進行了研究。
　　 1．龍血素B可誘導大鼠DRG神經元胞內鈣離子緩慢上調在本研究中，運用Fura-2熒光染色的方法觀察了在急性分離的DRG神經元細胞上由血竭中活性成分龍血素B誘導的游離態(tài)鈣離子的變化。結果發(fā)現，龍血素B會劑量依賴地引起DRG神經元胞

2、內鈣離子的上升。在細胞外液無鈣的條件下可引起同樣的效應，但胞內鈣離子的上升幅度相對較小。這表明DRG細胞內鈣離子的升高主要是由細胞外鈣離子內流，而不是由于細胞器如線粒體和胞內鈣庫的鈣離子釋放產生的。
　　 另外，咖啡因和龍血素B共孵育也可誘導胞內鈣離子的升高，但是其上升幅度明顯小于單獨施加咖啡因，提示龍血素B作用的靶器或通路與咖啡因誘導通路或靶器有所重疊。此外，與咖啡因，高鉀溶液和辣椒素相比，龍血素誘導的DRG神經元胞鈣離子的上

3、升更加緩慢且持續(xù)時間較長。這些結果表明，龍血素B可穩(wěn)定且與眾不同地誘發(fā)DRG神經元胞內鈣離子濃度升高。
　　 2．特異性鈉通道調制劑BmKI和BmK IT2的藥理協同作用在本研究中，運用Fura-2熒光染色方法分別觀察了特異性鈉通道位點3調制劑BmKI和特異性鈉通道位點4調制劑BmK IT2單體以及共給藥條件下引起腦突觸體膜鈣離子的變化，同時，運用免疫印記和行為學的方法的方法分別觀察了BmK I和BmKIT2誘導胞外細胞信號調節(jié)

4、激酶(ERK)磷酸化以及對大鼠驚厥發(fā)作的效應。結果發(fā)現，BmK IT2沒有能力改變突觸體膜鈣離子濃度或致ERK磷酸化。但是，BmK IT2對于BmK I引起的突觸體膜上鈣離子的上升具有正協同作用，且10∶1的BmK I和BmK IT2組合在加藥的前半段時間（0-7.5分鐘）鈣離子上升的速率最快。觀察鈣離子的下游靶點ERK發(fā)現，與單獨施加BmK I相比較，共同施加BmK I和BmK IT2可以使得突觸體膜內更加多的ERK磷酸化被激活。由于