乳腺癌干細胞對靶向治療、化療及內(nèi)分泌治療藥物的敏感性研究.pdf

1、目的：
　　1.研究mTOR新型靶向治療藥物依維莫司對未分選細胞和干細胞的差異作用，了解乳腺癌干細胞對依維莫司體內(nèi)、體外藥物敏感性。
　　2.將靶向治療藥物依維莫司及化療藥物多西紫杉醇聯(lián)合使用，了解乳腺癌干細胞對mTOR靶向治療和常規(guī)化療藥物聯(lián)合使用的藥物敏感性。
　　3.在體內(nèi)體外實驗中聯(lián)合應用依維莫司及曲妥珠單抗，以研究HER2陽性乳腺癌干細胞對mTOR和HER2靶點藥物聯(lián)合應用的敏感性。
　　4.聯(lián)合使用依

2、維莫司及內(nèi)分泌治療藥物來曲唑，了解芳香化酶高表達的乳腺癌干細胞對mTOR靶向治療和常規(guī)內(nèi)分泌治療藥物聯(lián)合使用的藥物敏感性。
　　方法：
　　1.細胞學試驗：使用流式儀分選出ESA+CD44+CD24-/low的乳腺癌干細胞亞群，利用MTT方法，檢測依維莫司、多西紫杉醇、曲妥珠單抗及來曲唑單藥對乳腺癌未分選細胞和乳腺癌干細胞的差異作用。以干細胞為研究對象，比較依維莫司單藥或聯(lián)合多西紫杉醇、曲妥珠單抗及來曲唑的差異作用，并通過流

3、式細胞儀，檢測單藥或聯(lián)合用藥對乳腺癌干細胞細胞周期和早期凋亡的影響；利用軟瓊脂克隆實驗，了解不同藥物作用后，乳腺癌干細胞的體外克隆形成能力的變化。
　　2.體內(nèi)移植瘤試驗：建立乳腺癌干細胞裸鼠移植瘤模型，隨機分組給予相應的單藥或聯(lián)合治療，同時記錄小鼠體重及移植瘤大小，以了解藥物對干細胞的體內(nèi)作用影響；利用SP免疫組化方法，檢測不同藥物作用下干細胞移植瘤中K167、CD31、AKT1、phospho-Akt(Thr308)的表達情況

4、，了解其作用機制。
　　結果：
　　1.乳腺癌干細胞對依維莫司的敏感性研究：在體外，依維莫司對乳腺癌干細胞存在一定的抑制作用，其不僅可以誘導乳腺癌干細胞GO-G1期的周期阻滯，并且可以誘導乳腺癌干細胞發(fā)生早期凋亡，且相較于對照組，依維莫司可以減少乳腺癌干細胞體外克隆形成的能力。在體內(nèi)，依維莫司可以有效的抑制乳腺癌干細胞移植瘤的增長，且顯著降低K167、CD31蛋白的表達，同時由于負反饋調(diào)節(jié)機制的存在，可導致AKT1，phos

5、pho-Akt(Thr308)的表達上調(diào)。
　　2.乳腺癌干細胞對依維莫司與多西紫杉醇聯(lián)合使用的藥物敏感性研究：相較于任意單藥組，該聯(lián)合應用在體外不僅可引起乳腺癌干細胞G2-M期阻滯和誘導其早期凋亡，而且可減低乳腺癌干細胞體外成瘤的能力。在體內(nèi)移植瘤的試驗中發(fā)現(xiàn)，依維莫司聯(lián)合多西紫杉醇組可顯著減小干細胞移植瘤的體積，且顯著降低K167及CD31表達，同時有效彌補了依維莫司單藥對AKT通路負反饋活化作用，導致AKT1，phospho

6、-Akt(Thr308)的表達下調(diào)。
　　3.乳腺癌干細胞對依維莫司與曲妥珠單抗聯(lián)合使用的敏感性研究：HER2陽性乳腺癌干細胞對靶向治療藥物曲妥珠單抗具有一定的耐藥性。而聯(lián)合應用曲妥珠單抗與依維莫司可有效地抑制HER2陽性：乳腺癌干細胞的生長增殖。與對照組相比，依維莫司或曲妥珠單抗單獨作用均可導致滯留在G0-G1期的BT474干細胞顯著增加，然而，當兩種藥物聯(lián)合使用時，發(fā)現(xiàn)BT474干細胞滯留在GO-G1期且早期凋亡的比例增大；聯(lián)

7、合使用藥物可以有效抑制HER2陽性干細胞的克隆形成能力。在體內(nèi)移植瘤的試驗中發(fā)現(xiàn)，兩藥聯(lián)合使用可以更有效的抑制乳腺癌干細胞體外移植瘤的大小，同時可以降低K167、AKT1以及pAKT的表達。
　　4.乳腺癌干細胞對依維莫司與來曲唑聯(lián)合使用的敏感性研究：聯(lián)合應用來曲唑與依維莫司可有效地抑制MCF-7/Aro干細胞的生長增殖。與對照組相比，兩種藥物聯(lián)合使用時MCF-7/Aro干細胞滯留在G0-G1期的比例顯著增加，且其具有誘導早期凋亡

8、的作用；同時聯(lián)合使用藥物可以有效抑制MCF-7/Aro干細胞的克隆形成能力。在體內(nèi)移植瘤的試驗中發(fā)現(xiàn)，兩藥聯(lián)合可更有效的抑制乳腺癌干細胞體外移植瘤的大小，同時顯著降低移植瘤中K167、pAKT的表達。
　　結論：
　　1.在mTOR抑制劑依維莫司的作用下，乳腺癌干細胞的生長增殖受到了抑制。
　　2.乳腺癌干細胞對常規(guī)化療藥物多西紫杉醇具有一定的耐藥性。而聯(lián)合應用多西紫杉醇與依維莫司可有效地抑制乳腺癌干細胞體內(nèi)、體外的生