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1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文Wip1在肺癌細(xì)胞中的表達(dá)及其作用機(jī)制初探姓名:趙吉星申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):外科學(xué)指導(dǎo)教師:顧勇20090604Wipl在肺癌細(xì)胞中的表達(dá)及其作用機(jī)制初探中文摘要研究目的檢測Wipl及Wiplp38MAPKp53信號通路相關(guān)蛋白在肺癌細(xì)胞中的表達(dá)情況,探討Wipl在肺癌發(fā)生中的作用機(jī)制,尋求肺癌靶向治療的新靶點(diǎn)。方法1人工培養(yǎng)二llzd細(xì)胞肺癌(nonsmallcelllungcancer,NSCLC)細(xì)胞(肺腺癌
2、細(xì)胞A549、肺鱗癌細(xì)胞NCI1299、大細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI一11460)和正常支氣管上皮細(xì)胞HBE。2抽提各種細(xì)胞總RNA進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng),經(jīng)PCR擴(kuò)增目的片段及18srRNA對照片段,以Wipl和18srRNA擴(kuò)增片段的圖像強(qiáng)度比值表示W(wǎng)iplmRNA的表達(dá)水平,分析WiplmRNA在肺癌細(xì)胞和正常支氣管上皮細(xì)胞的表達(dá)情況以及在不同肺癌細(xì)胞中表達(dá)的差異。3抽提細(xì)胞蛋白,以westernblot檢測Wipl蛋白的表達(dá),以Wi
3、pl蛋白和GAPDH蛋白圖像的灰度比值表示W(wǎng)ipl蛋白的含量水平,并分析Wipl蛋白在肺癌細(xì)胞和正常支氣管上皮細(xì)胞的表達(dá)情況以及在不同肺癌細(xì)胞中表達(dá)的差異。4抽提細(xì)胞蛋白,以westernblot檢測p53、pp53、p38MAPK和pp38MAPK蛋白的表達(dá)水平,以其蛋白和GAPDH蛋白圖像的灰度比值表示其蛋白的含量水平,并分析Wiplp38MAPKp53通路的相關(guān)蛋白在肺癌細(xì)胞和正常支氣管上皮細(xì)胞的表達(dá)情況。結(jié)果lA549、NCI1
4、299、H460細(xì)胞中WiplmRNA的表達(dá)均高于HBE,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(腳05);各種肺癌細(xì)胞間WiplmRNA的表達(dá)無明顯差異(舢05)。2A549、NCI1299、H460細(xì)胞中Wipl蛋白的表達(dá)均高于HBE,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(氏o05);各種肺癌細(xì)胞間Wipl蛋白的表達(dá)無明顯差異(舢05)。3Pp53和pp38MAPK蛋白在肺癌細(xì)胞中的表達(dá)低于HBE,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(PO05),肺癌細(xì)胞中:Wiplt、pp38MAPKl、p
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