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文檔簡介
1、目的:
1、建立大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血模型,靜脈給予外源性CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞,探討腦組織炎性細(xì)胞浸潤的變化。
2、觀察CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞靜脈輸注治療后蛛網(wǎng)膜下腔出血大鼠模型腦組織中TLR4、NF-κB,以及血漿中相關(guān)炎性因子表達(dá)的變化,探討CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞對蛛網(wǎng)膜下腔出血后炎癥反應(yīng)的抑制作用。
方法:
1、用免疫磁珠兩步法,從大鼠的脾臟及淋巴結(jié)中分離、獲取高純度的
2、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞。枕大池二次注血法制作SAH大鼠模型。隨機(jī)將健康成年雄性wister大鼠隨機(jī)分為正常組、假手術(shù)組、SAH組,SAH組分為靜脈PBS輸注組(PBS組)、脾細(xì)胞(spleencells,SP)輸注組和Treg輸注組。于術(shù)后2天斷頭取腦,免疫組化法檢測腦組織中的炎性細(xì)胞浸潤情況。
2、選用成年健康的雄性wister大鼠,枕大池二次注血法制作大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血模型。隨機(jī)將動物分為正常組、假手術(shù)組、蛛網(wǎng)膜下腔出血組(SAH組
3、),蛛網(wǎng)膜下腔出血組分為靜脈PBS輸注組、脾細(xì)胞(spleencells,SP)輸注組和Treg輸注組。術(shù)后第2天斷頭取腦,由股靜脈留取靜脈血,免疫組化法檢測腦組織中TLR4的表達(dá),westernbolt法檢測腦組織中TLR4、NF-κB蛋白水平,ELISA法檢測外周血中炎性細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6水平的變化。
結(jié)果:
與假手術(shù)組相比,SAH后腦組織中性粒細(xì)胞浸潤明顯增多,TLR4表達(dá)也有明顯升高。同
4、時,SAH組NF-κB表達(dá)水平顯著增高。血漿中IL-1β、TNF-α、 IL-6表達(dá)顯著增高。與PBS治療組和SP治療組相比,Treg治療組腦組織中TLR4,NF-κB水平顯著降低,血漿中IL-1β、TNF-α、IL-6表達(dá)也降低(P<0.05)。
結(jié)論:
SAH早期出現(xiàn)腦血管痙攣及腦損傷后,炎性因子、NF-κB的表達(dá)與TLR4有關(guān)。TLR4在腦室周圍的血管叢中表達(dá)較多,在小膠質(zhì)、星形膠質(zhì)細(xì)胞,少量分布于腦血管內(nèi)的內(nèi)
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