NOS、NO、ET-1及TGF-β1在甲狀腺功能亢進(jìn)大鼠心肌組織中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：通過(guò)對(duì)一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)、一氧化氮(nitric oxide，NO)、內(nèi)皮素-1(endothelin-1，ET-1)及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(transforming growth factor betal，TGF-β1)在甲狀腺功能亢進(jìn)癥(簡(jiǎn)稱(chēng)甲亢，Hyperthyroidsm，TH)大鼠心肌組織中的表達(dá)及動(dòng)態(tài)變化的觀察，探討以上因子在甲亢性心臟損傷發(fā)病過(guò)程中的作用及意義，以及它們之間

2、的關(guān)系。 方法：通過(guò)給予左甲狀腺素鈉(L-T4，商品名為優(yōu)甲樂(lè))連續(xù)灌胃的方法制作甲亢大鼠模型，期間所有大鼠均自由進(jìn)食水，在25天、45天、60天分批宰殺對(duì)照組(分別為A1、A2、A3組)和甲亢組(分別為B1、B2、B3組)，動(dòng)態(tài)觀察大鼠心肌組織的病理改變及損傷情況，并通過(guò)酶法測(cè)定心肌組織中NOS、NO的含量及免疫組化方法觀察ET-1、TGF-β1的表達(dá)。 結(jié)果： 1.癥狀及體征：對(duì)照組大鼠進(jìn)食水情況、精神狀態(tài)、

3、大小便情況及日?；顒?dòng)均正常且三組之間無(wú)明顯變化。對(duì)照大鼠平均體重穩(wěn)定增加。甲亢組大鼠飲食、飲水較對(duì)照組明顯增加，大便呈糊狀，并含有不消化食物；毛色無(wú)光澤，大部分出現(xiàn)嚴(yán)重的脫毛現(xiàn)象；活動(dòng)增加、驚恐躁動(dòng)、易受激惹及肌肉細(xì)微震顫等，體重與同期對(duì)照組相比均顯著減輕(P＜0.05)。 2.甲狀腺功能測(cè)定： 甲亢組B1、B2、B3的FT3、FT4均較同期對(duì)照組顯著升高(P＜0.01)，且隨著病程的延長(zhǎng)進(jìn)行性升高，TSH均較同期對(duì)照組

4、顯著降低(P＜0.01)并隨著病程的延長(zhǎng)進(jìn)行性下降。 3.血生化檢測(cè)結(jié)果： 心肌酶：甲亢組大鼠CK、CK-MB、AST均較同期對(duì)照組顯著升高(P＜0.01)，且隨著病程的延長(zhǎng)，呈進(jìn)行性升高；LDH、α-HBDH在B1組較對(duì)照組升高，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，LDH在B2組較對(duì)照組顯著升高(P＜0.05)，在B3組其升高更顯著(P＜0.01)，α-HBDH只在B3組較對(duì)照組顯著升高(P＜0.05)。 4 心臟重量及心臟重量指

5、數(shù)(心重/體重，HW/BW)的測(cè)定： 甲亢組大鼠心臟重量在B1組較同期對(duì)照組有所增加，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，B2、B3組心臟重量較對(duì)照組顯著增加(P＜0.01)；HW/BW在B1組較同期對(duì)照組顯著增加(P＜0.01)，B2、B3組其變化更加明顯。 5 心肌病理改變： 光鏡下觀察：對(duì)照組大鼠心肌纖維排列規(guī)則，結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞核染色質(zhì)均勻分布，核呈橢圓形，心肌細(xì)胞之間排列緊密，細(xì)胞核致密，大小形狀規(guī)則，間質(zhì)中血管壁細(xì)胞呈單層

6、排列且規(guī)則；甲亢組大鼠心肌細(xì)胞排列紊亂，心肌細(xì)胞肥大，胞漿淡染，細(xì)胞核明顯增大松散，細(xì)胞濁腫，心肌間結(jié)締組織增生，心肌纖維有斷裂現(xiàn)象，分支增多，間隙增寬，間質(zhì)中血管壁增厚，中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，間質(zhì)充血。 6 心肌組織中NOS、NO的測(cè)定： 甲亢組大鼠心肌組織中NO、結(jié)構(gòu)型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，cNOS)、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(induced nitric o

7、xide synthase，iNOS)的表達(dá)在B1組較同期對(duì)照組無(wú)明顯變化(P＞0.05)。NO、cNOS從B2組起較對(duì)照組顯著降低(P＜0.01)，且隨病程延長(zhǎng)進(jìn)行性降低，iNOS從B2組起較對(duì)照組顯著升高(P＜0.05)，B3組升高更明顯(P＜0.01)。 7 免疫組化測(cè)定結(jié)果： 甲亢組大鼠心肌中ET-1的表達(dá)在B1組較同期對(duì)照組顯著增強(qiáng)(P＜0.05)，B2、B3組時(shí)其改變更加顯著(P＜0.01)；甲亢組大鼠心肌中

8、TGF-β1的表達(dá)在B1組較對(duì)照組雖有所增強(qiáng)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，B2、B3組較同期對(duì)照組表達(dá)顯著增強(qiáng)(P＜0.01)。 8 甲狀腺功能與心肌酶，心臟重量及心肌組織中表達(dá)因子的直線相關(guān)分析結(jié)果： CK、CKMB、AST均與FT3、FT4呈顯著正相關(guān)(P＜0.01)，與TSH呈顯著負(fù)相關(guān)(P＜0.01)；LDH與FT3、FT4呈顯著正相關(guān)(P＜0.01)，與TSH呈顯著負(fù)相關(guān)(P＜0.05)，α-HBDH只與FT4呈明顯正相關(guān)

9、(P＜0.05)，而與FT3、TSH無(wú)明顯相關(guān)性。 HW/BW與FT3、FT4呈顯著正相關(guān)(P＜0.01)，與TSH呈顯著負(fù)相關(guān)(P＜0.01)。 NO、cNOS與FT3、FT4呈顯著負(fù)相關(guān)(P＜0.01)，與TSH呈顯著正相關(guān)(P＜0.01)；iNOS與FT3、FT4呈顯著正相關(guān)(P＜0.01)，與TSH呈顯著負(fù)相關(guān)(P＜0.05)。 ET-1、TGF-β1均與FT3、FT4呈顯著正相關(guān)(P＜0.01)，與TS

10、H呈顯著負(fù)相關(guān)(P＜0.01)。 9 其他直線相關(guān)分析結(jié)果： CK、CK-MB、AST、LDH與ET-1、TGF-β1(平均灰度值)均呈顯著負(fù)相關(guān)，α-HBDH與ET-1、TGF-β1均無(wú)相關(guān)性。 HW/BW與ET-1、TGF-β1(平均灰度值)均呈顯著負(fù)相關(guān)。 NO、cNOS與ET-1、TGF-β1(平均灰度值)呈顯著正相關(guān)，iNOS與ET-1、TGF-β1(平均灰度值)呈顯著負(fù)相關(guān)； ET-1

11、、TGF-β1之間存在顯著正相關(guān)性(P＜0.01)。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)通過(guò)給予左旋甲狀腺素灌胃法建立甲狀腺功能亢進(jìn)大鼠模型，模型組灌胃后出現(xiàn)甲亢癥狀，同時(shí)甲狀腺功能檢查也符合甲亢的特點(diǎn)，并隨著甲亢病程的進(jìn)展，出現(xiàn)了心臟損傷，表現(xiàn)為心肌肥厚、心臟重量增加、HW/BW比值增加和心肌酶的升高。隨著甲亢病程的延長(zhǎng)，心臟損傷進(jìn)行性加重，通過(guò)動(dòng)態(tài)觀察心臟組織形態(tài)、血清心肌酶學(xué)、心肌組織中NO、NOS、ET-1及TGF-β1的表達(dá)變化及相關(guān)分析，