慢性心力衰竭大鼠心肌組織中TGF-β1和CTGF的動態(tài)表達(dá).pdf

1、慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)為各種心臟疾病的終末期表現(xiàn),是導(dǎo)致心臟病患者死亡重要因?yàn)?。近年?隨著我國高血壓病和冠心病發(fā)病率的持續(xù)上升,CHF的發(fā)病率隨之上升,已成為嚴(yán)重威脅人們健康的重要疾病。心肌纖維化是CHF的重要病理基礎(chǔ),因此防治心肌纖維化已成為近年來研究的熱點(diǎn)。在心肌纖維化的發(fā)生和發(fā)展過程中,一系列促炎因子發(fā)揮著重要的作用,其中轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforminggrowth fac

2、tor-β1,TGF-β1)和結(jié)締組織生長因子(connective tissue growthfactor,CTGF)近年來引起了人們的關(guān)注,本研究采用腎上腹主動脈縮窄術(shù)建立CHF心肌纖維化模型,探討TGF-β1和CTGF在心肌纖維化發(fā)生、發(fā)展過程中的作用。
　　 目的:
　　 采用腎上腹主動脈縮窄方法建立CHF心肌纖維化的動物模型。采用免疫組織化學(xué)染色、RT-PCR方法,從細(xì)胞水平和分子水平觀察TGF-β1和CTGF

3、在壓力負(fù)荷型心力衰竭大鼠心肌組織中的動態(tài)表達(dá),探討TGF—β1和CTGF與心肌纖維化發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。
　　 方法:
　　 1清潔級雄性Wistar大鼠42只,隨機(jī)抽取8只作為假手術(shù)組,其余大鼠全部采用腎上腹主動脈縮窄術(shù)制作CHF模型。以左室舒張末壓(leftventricular end diastolic pressure,LVEDP)≥15mmHg作為成模標(biāo)準(zhǔn)。待模型建立成功后,將剩余大鼠隨機(jī)分為3組,即心衰1d、

4、心衰7d、心衰14d組,每組8只。假手術(shù)組只做分離不做結(jié)扎。
　　 2各組大鼠到達(dá)觀察終點(diǎn)時,采用多導(dǎo)電生理記錄儀檢測血流動力學(xué)參數(shù)LVEDP及左室內(nèi)壓上升、下降最大速率(left ventricular pressure riseand fall,±dp／dtmax),取左心室并計算左心室質(zhì)量指數(shù)(the left ventricularmass index,LVMI)。
　　 3采用蘇木素-伊紅(HE)染色和Mass

5、on染色法觀察各組大鼠左心室心肌組織病理學(xué)改變,并檢測左心室心肌膠原容積分?jǐn)?shù)(collagenvolume fraction,CVF)。
　　 4采用透射電鏡觀察各組大鼠左心室心肌組織超微結(jié)構(gòu)。
　　 5采用SP免疫組織化學(xué)染色法檢測各組大鼠左心室心肌組織TGF-β1和CTGF蛋白的表達(dá)。
　　 6采用RT-PCR法檢測各組大鼠左心室心肌組織TGF-β1和CTGFmRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　

6、 1各組大鼠血流動力學(xué)參數(shù):心衰1d組、心衰7d組和心衰14d組大鼠LVEDP分別為(15.56±1.69)mmHg、(17.87±2.19)mmHg和(20.03±1.93)mmHg,明顯高于假手術(shù)組(P<0.01)。心衰1d組、心衰7d組和心衰14d組大鼠±dp／dtmax分別為(4673.62±206.63)mmHg／s,(3339.74±238.65)mmHg／s；(4360.26±239.65)mmHg／s,(3091.85

7、±245.24)mmHg／s和(4120.59±215.13)mmHg／s,(2860.20±199.73)mmHg／s,與假手術(shù)組大鼠比較明顯降低(P<0.01),并且隨著心衰時間的延長,大鼠心功能逐漸惡化。
　　 2各組大鼠左心室心肌組織病理學(xué)改變 HE染色:假手術(shù)組大鼠心肌細(xì)胞排列整齊,形態(tài)正常,細(xì)胞質(zhì)紋理清晰；心衰1d組、心衰7d組和心衰14d組大鼠隨著心衰時間的延長,逐漸出現(xiàn)心肌細(xì)胞肥大,心肌纖維排列紊亂,呈現(xiàn)波浪狀,

8、甚至斷裂。Masson染色:假手術(shù)組大鼠心肌無明顯膠原沉積,心衰1d組、心衰7d組和心衰14d組大鼠隨著心衰時間的延長,心肌膠原沉積逐漸增多。
　　 3各組大鼠LVMI和CVF:心衰1d組、心衰7d組、心衰14d組大鼠LVMI和CVF分別為(2.53±0.17)‰,(15.62±1.83)％；(2.86±0.28)‰,(22.31±2.34)％；(3.15±0.26)‰,(25.12±2.96)％。與假手術(shù)組大鼠比較明顯升高(P

9、<0.01),且隨著心衰時間的延長逐漸升高。
　　 4各組大鼠左心室心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)觀察假手術(shù)組大鼠心肌肌原纖維排列整齊,Z帶清晰可見,線粒體結(jié)構(gòu)清晰完整,無腫脹及空泡樣變,心肌間質(zhì)極少有膠原纖維沉積。心衰1d組、心衰7d組和心衰14d組大鼠心肌組織逐漸出現(xiàn)肌原纖維排列紊亂,肌節(jié)錯位,Z帶部分消失。線粒體腫脹、嵴不同程度溶解斷裂,心肌間質(zhì)有較多的膠原纖維沉積。
　　 5各組大鼠左心室心肌組織TGF-β1的表達(dá)TGF-β1

10、蛋白免疫陽性產(chǎn)物呈棕黃色顆粒狀,位于心肌細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞間質(zhì),以細(xì)胞間質(zhì)為主。與假手術(shù)組大鼠比較,心衰1d組、心衰7d組和心衰14d組大鼠心肌組織TGF-β1蛋白及mRNA的表達(dá)均明顯升高(P<0.01),且隨著心衰時間的延長,表達(dá)逐漸增強(qiáng),心衰各組間比較有明顯差異(P<0.01,P<0.05)。
　　 6各組大鼠左心室心肌組織CTGF的表達(dá)CTGF蛋白免疫陽性產(chǎn)物呈棕黃色顆粒狀,位于心肌細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞間質(zhì),以細(xì)胞質(zhì)為主。

11、與假手術(shù)組大鼠比較,心衰1d組、心衰7d組和心衰14d組大鼠心肌組織CTGF蛋白及mRNA的表達(dá)均明顯升高(P<0.01,P<0.05),且隨著心衰時間的延長,表達(dá)逐漸增強(qiáng),心衰各組間比較有明顯差異(P<0.01)。
　　 結(jié)論:
　　 1通過腎上腹主動脈縮窄術(shù)可成功復(fù)制CHF心肌纖維化的模型,并且與人類心肌纖維化病理過程相似。
　　 2 CHF大鼠心肌纖維化時,心肌組織中TGF-β1和CTGF表達(dá)上調(diào),并且其水