版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、目的:體外分離、培養(yǎng)小鼠精原干細胞(mSSCs);誘導其定向分化,檢測生殖細胞核因子(GCNF)和Oct-4在mSSCs誘導分化前后的表達。本研究將有助于進一步闡明精子發(fā)生的分子機制,為轉(zhuǎn)基因技術和臨床生殖醫(yī)學的諸多方面提供參考。 方法:應用酶消化6-8天新生小鼠睪丸制備睪丸細胞懸液,以DMEM+10%胎牛血清+白血病抑制因子(LIF)+L-谷氨酰胺等為培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。用堿性磷酸酶(AKP)細胞化學染色,c-Kit、oct-4和
2、GCNF間接免疫熒光對原代培養(yǎng)的mSSCs進行鑒定;用干細胞因子(SCF)誘導mSSCs向精母細胞分化,通過間接免疫熒光染色和RT-PCR,檢測GCNF和Oct-4在mSSCs誘導分化前后的表達。 結(jié)果:細胞接種培養(yǎng)后,睪丸支持細胞(Sertoli)貼壁速度較快且呈成纖維細胞樣等不規(guī)則形狀,而mSSCs貼壁速度較慢且一直呈圓形或橢圓形,核大、胞質(zhì)較少,48h后,有mSSCs克隆形成。這些mSSCs克隆具有AKP活性,c-kit和
3、Oct-4間接免疫熒光染色均呈陽性。mSSCs向精母細胞方向誘導2天后,Oct-4表達下調(diào),而GCNF轉(zhuǎn)為陽性表達,上述GCNF和Oct-4間接免疫熒光染色的陽性反應主要定位于細胞核。RT-PCR與間接免疫熒光的結(jié)果基本一致,即誘導2天后,Oct4表達下調(diào),而GCNF轉(zhuǎn)為陽性表達。 結(jié)論: (1)成功建立了mSSCs的體外培養(yǎng)體系,為mSSCs的體外研究提供了一種便捷的方法。 (2)首次觀察到GCNF在體外培養(yǎng)m
4、SSCs向精母細胞分化的早期有表達,且GCNF的表達與Oct-4基因的表達呈負相關。提示GCNF可能參與了SSCs的早期分化,GCNF可能是通過抑制了Oct-4的表達參與SSCs分化。 (3)本研究結(jié)果顯示,GCNF在體外培養(yǎng)的mSSCs中表達為陰性,當誘導其分化后GCNF開始表達,提示GCNF的表達可作為鑒別mSSCs是否分化的標志。 (4)GCNF在mSSCs定向分化中可能發(fā)揮的作用以及mSSCs的分化機制有待于進一
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 生殖細胞體外分化過程中LncRNA表達譜的研究.pdf
- 生殖細胞核因子在發(fā)育中睪丸和附睪表達特征的研究.pdf
- 小鼠精原干細胞體外分化及相關基因表達的研究.pdf
- 山羊精原干細胞體外增殖及其分化的調(diào)控.pdf
- 生殖細胞核因子和OCT-4在宮頸癌中的表達研究.pdf
- 體外誘導孤雌胚胎干細胞向生殖細胞分化.pdf
- 山羊骨髓間充質(zhì)干細胞向生殖細胞體外轉(zhuǎn)分化的初步研究.pdf
- 骨髓間充質(zhì)干細胞體外分化為雄性生殖細胞樣細胞的改良誘導法.pdf
- DAZL基因轉(zhuǎn)染人臍帶間充質(zhì)干細胞體外向男性生殖細胞分化的研究.pdf
- 大鼠精原干細胞體外培養(yǎng)的實驗研究.pdf
- 雞胚原始生殖細胞體外培養(yǎng)及其誘導分化的研究.pdf
- 雞精原干細胞體外培養(yǎng)及其誘導分化的研究.pdf
- 雞精原干細胞體外培養(yǎng)及不同細胞因子的影響.pdf
- 人原始生殖細胞體外培養(yǎng)的初步研究.pdf
- 小鼠生殖細胞體外發(fā)育營養(yǎng)調(diào)控的研究.pdf
- 新生牛精原干細胞體外增殖調(diào)控的研究.pdf
- 小鼠精原干細胞體外培養(yǎng)體系的初步研究.pdf
- 枸杞多糖對精原干細胞體外增殖的影響.pdf
- 人多能性干細胞向生殖細胞誘導分化的研究.pdf
- 誘導多能干細胞向生殖細胞分化的實驗研究.pdf
評論
0/150
提交評論