半枝蓮黃酮類化合物抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移與基底膜黏附的實驗研究.pdf

1、多種腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)和預(yù)后均與腫瘤血管生成密切相關(guān)，這個復(fù)雜的多步驟過程中包括黏附、基質(zhì)降解與移動，抑制其中任何一個過程理論上均可抑制腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移。因此，以腫瘤血管生成為靶點，開發(fā)血管生成抑制劑在抗腫瘤研究中是一個新的十分活躍的研究領(lǐng)域。目前大約發(fā)現(xiàn)了300多種具有血管生成抑制活性的化合物其中超過30個進入臨床Ⅰ到Ⅲ期研究，但是目前臨床試驗的結(jié)果表明很多藥物在抑制血管生成的同時帶來了不可抵抗的毒副作用，因此人們逐漸將目光轉(zhuǎn)向了天

2、然藥物的研究。祖國醫(yī)學(xué)中中藥具有取材簡便，毒副作用少的特點，因此以天然藥物為研究對象，來探討和研究新型的抗腫瘤藥物已逐漸成為當(dāng)今熱點。本試驗旨在研究并證明傳統(tǒng)中藥半枝蓮活性成分的抗腫瘤活性，繼之課題組的前期研究結(jié)果，從血管內(nèi)皮生長因子、基質(zhì)金屬蛋白酶-2以及整合素αγβ 3等角度探討半枝蓮活性成分的抗腫瘤作用機制，為進一步開發(fā)高效低毒的抗腫瘤藥物奠定理論基礎(chǔ)。 我們采用系統(tǒng)溶劑分離法、硅膠柱層析法等方法，獲得半枝蓮不同極性的提取

3、物以MTT比色試驗及流式細(xì)胞術(shù)等技術(shù)為手段，從中篩選出抑制內(nèi)皮細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞增殖作用最強的成分。采用免疫熒光術(shù)、ELISA等方法，進一步研究其抑制腫瘤生長、侵襲和轉(zhuǎn)移的作用及其機理。 實驗結(jié)果如下： 1.半枝蓮黃酮類化合物的提取與分離：硅膠柱層析法以氯仿．甲醇混合溶劑梯度洗脫(10:0； 100:1； 100:4；100:8；100:20；100:50；0:1)，收集洗脫液，由硅膠薄層(TLC)檢識，合并相同流份，共得7

4、個極性部位(A、B、C、D、E、F、G)。 2.半枝蓮抑制內(nèi)皮細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞增殖有效成分的篩選：各部位經(jīng)MTT法檢測活性，最后得活性強的部位。活性最強的半枝蓮黃酮類化合物不同濃度(20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml)與空白對照組比較能有效抑制ECV-304細(xì)胞系、SGC-790l細(xì)胞系以及B16-BL6細(xì)胞系的增殖。 3.半枝蓮黃酮類化合物能誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞的凋亡：取30μg/ml、60μg/ml、120μg/ml、24

5、0μg/ml四個濃度梯度，隨濃度增加細(xì)胞凋亡率也增加，但30μg/ml組與空白組比較沒有顯著差異，當(dāng)濃度達到120μg/ml時，胃癌細(xì)胞凋亡增加，與空白對照組比較有顯著差異(P<0.01)。 4.半枝蓮黃酮類化合物能抑制：ECV-304細(xì)胞系和B16BL6細(xì)胞系對基底膜黏附能力：作用B16BL6細(xì)胞60min后高劑量組(40μg/ml)與對照組之間統(tǒng)計有顯著差異(p<0.01)，作用120min后中高劑量組(20μg/ml、40

6、μg/ml)與對照組比較有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(p<0.01)，各劑量組從低到高其粘附率呈遞減趨勢；作用后的ECV-304對基底膜的黏附率在60min與對照組比較無差異，作用120min后濃度達到40μg/ml時其對基底膜的黏附率與對照組比較有差異(P<0.01)。 5.半枝蓮黃酮類化合物能抑制ECV-304細(xì)胞系與B16-BL6細(xì)胞系之間黏附能力：半枝蓮黃酮類化合物作用120min后B16-BL6細(xì)胞系對內(nèi)皮細(xì)胞的黏附能力顯著下降，

7、與空白組比較有顯著差異(P<0.01)。 6.半枝蓮黃酮類化合物能抑制SGC-7901細(xì)胞VEGF、MMP-2的表達：同一時間段與空白對照組相比，半枝蓮黃酮類化合物各濃度作用細(xì)胞24、48h后均能明顯抑制腫瘤細(xì)胞的VEGF表達，具有顯著差異(p<0.01)。半枝蓮黃酮類化合物作用細(xì)胞48h后中、高濃度組(40gg/ml、80μg/ml)能抑制腫瘤細(xì)胞MMP-2的表達，與對照組比較有顯著差異(p<0.01)。同一濃度體系，24h與

8、48h相比在中、高濃度時對VEGF表達影響具有差異性(P<0.01)，高濃度時對MMP-2表達影響具有差異性(P<0.01)，其他濃度相比沒有顯著差異。 結(jié)論：半枝蓮黃酮類化合物C在體外具有抑制VEGF及MMP-2表達的作用，并抑制內(nèi)皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞對基底膜的黏附能力，其機理可能通過抑制腫瘤細(xì)胞黏附分子和其他促血管生成相關(guān)因子的表達，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞凋亡、抑制內(nèi)皮細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞的增殖從而阻斷腫瘤血管生成，抑制腫瘤的遠處轉(zhuǎn)移