大葉藻中黃酮類(lèi)化合物的研究.pdf

1、研究報(bào)道,黃酮類(lèi)化合物具有廣泛的生物活性,包括抗氧化、抗突變、抗衰老、抗腫瘤、抗菌等,是茶及眾多中草藥如黃芩、銀杏、沙棘等的活性成分。黃酮可以改善血液循環(huán),降低膽固醇,改善心腦血管疾病的癥狀。本文主要介紹從大葉藻中提取分離純化黃酮類(lèi)化合物,并研究黃酮粗提物的抗氧化活性。
　　 本文首先綜述了大葉藻的生物門(mén)類(lèi)、生活習(xí)性,黃酮類(lèi)化合物的分類(lèi)、生物活性、各種理化性質(zhì)和顯色反應(yīng)等,并對(duì)國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)中黃酮類(lèi)化合物的提取、純化、分離和分析過(guò)程

2、的研究進(jìn)展進(jìn)行了概述和比較。
　　 試驗(yàn)中,首先測(cè)定了大葉藻中各種基本成分的含量,總糖含量:7.1％,粗脂肪含量:1.2％,蛋白質(zhì)含量:5.21％,在已測(cè)定的16中氨基酸中,每100g大葉藻中氨基酸含量可達(dá)21.134g,其中必須氨基酸有6種,共7.470g,占氨基酸總量的35.346％,非必須氨基酸總量為13.664g,占必須氨基酸總含量的64.654％。在必須氨基酸中,以纈氨酸含量最高,占必須氨基酸含量的23.655％,蛋氨

3、酸含量最低,占必須氨基酸含量的7.416％。在非必須氨基酸中,谷氨酸含量最高,占非必須氨基酸含量的23.259％,以組氨酸含量最低,占非必須氨基酸含量的2.518％。
　　 其次進(jìn)行了黃酮類(lèi)化合物的浸提試驗(yàn),試驗(yàn)中總黃酮含量分析采用酸性條件下氯化鋁顯色的可見(jiàn)分光光度法。乙醇作為浸提液,研究了傳統(tǒng)工藝浸提法、超聲波輔助浸提法、纖維素酶輔助浸提法和纖維素酶-超聲波輔助浸提法,得到了這四種提取方法對(duì)黃酮的最佳浸提條件,并對(duì)其最大提取率

4、進(jìn)行比較,傳統(tǒng)工藝提取法最佳提取工藝:提取溫度55℃,提取時(shí)間3h,乙醇濃度為85％,提取料液比為1:30,最大提取率為1.84％;超聲波輔助浸提法最佳提取工藝條件:超聲時(shí)間15min,超聲功率300W,乙醇濃度20％,料液比1:10,最大提取率為3.80％;酶解輔助浸提法最佳提取條件:加酶量為0.030g/g原料、酶解時(shí)間為25℃、酶解pH為4、酶解時(shí)間1h,最大提取率為5.93％;纖維素酶-超聲波輔助浸提法最佳提取條件:超聲時(shí)間15

5、min,超聲功率250W,纖維素酶量0.025g/g原料,酶解PH5,最大提取率為7.86％。結(jié)果表明,纖維素酶-超聲波輔助浸提法的提取率最高。
　　 浸提得到的粗黃酮提取物,進(jìn)行硅膠層析柱的初步分離純化。首先是使用極性由小到大的各種有機(jī)溶劑連續(xù)抽提(石油醚-乙酸乙酯-正丁醇-水),從而將親脂性的成分和親水性的成分分開(kāi)。然后詳細(xì)的對(duì)液液萃取純化后的成分用硅膠板進(jìn)行了展開(kāi)劑的選擇,發(fā)現(xiàn)氯仿:甲醇系統(tǒng)對(duì)該混合物具有較好的展開(kāi)性能,再

6、用硅膠柱層析對(duì)液液萃取純化后的粗提物進(jìn)行了分離純化,最后采用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)純化物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行檢測(cè)分析。分析得到了七種黃酮化合物:(1)3,4,5,4'-四甲氧基查耳酮;(2)3,4-二甲氧基-8,9-二氧亞甲基紫檀素;(3)5-羥基-7,4'-二甲氧基黃酮;(4)5,7,5'-三羥基-4'-甲氧基二氫黃酮;(5)5,7-二羥基-4'-甲氧基黃酮醇;(6)4',5'-二羥基-7-甲氧基黃酮醇;(7)5,7,4'-三羥基黃酮。

7、　　 在所發(fā)現(xiàn)的七種黃酮類(lèi)物質(zhì)中,5,7,4'-三羥基黃酮具有與毛地黃黃酮相似的結(jié)構(gòu),所不同之處是由于5,7,4'-三羥基黃酮在3'位置是一個(gè)氫而不是一個(gè)羥基。根據(jù)相似結(jié)構(gòu)具有相似特性,可推測(cè)5,7,4'-三羥基黃酮也應(yīng)該與有與毛地黃黃酮相似的特性,需要做進(jìn)一方面的驗(yàn)證和檢測(cè)。5,7-二羥基-4'-甲氧基黃酮醇具有與金雀花異黃素相似的結(jié)構(gòu)特征,而金雀花異黃素具有雌性激素的作用,因此可推測(cè)5,7-二羥基-4'-甲氧基黃酮醇具有雌激素的作

8、用,需進(jìn)一步的驗(yàn)證和分析。其中的3,4,5,4'-四甲氧基查耳酮,3,4-二甲氧基-8,9-二氧亞甲基紫檀素和5-羥基-7,4'-二甲氧基黃酮這三種物質(zhì)含甲氧基較多,據(jù)研究發(fā)現(xiàn)多聚甲氧基的脂溶性黃酮具有較強(qiáng)的抗腫瘤特性,這是由于聚甲氧基的黃酮類(lèi)呈脂溶性,更易于接近并浸透到腫瘤細(xì)胞而起到作用。因此這三種黃酮對(duì)于開(kāi)發(fā)新的抗腫瘤藥物具有一定的實(shí)際利用價(jià)值。而其中5,7,5'-三羥基-4'-甲氧基二氫黃酮、5,7-二羥基-4'-甲氧基黃酮醇、5

9、,7,4'-三羥基黃酮屬于多羥基黃酮醇,而多羥基黃酮醇類(lèi)化合物經(jīng)生物學(xué)試驗(yàn),證實(shí)可用于升高血漿高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C),降低血漿低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)和血漿甘油三脂(TG)。這些黃酮類(lèi)物質(zhì)對(duì)于預(yù)防和治療諸如外周血管疾病、冠心病、中風(fēng)疾病、血管再狹窄等血管疾病具有一定的功效。
　　 本文采用大葉藻為提取原料一方面有效利用了大葉藻,另一方面為抗腫瘤抗癌及心腦血管疾病藥物的開(kāi)發(fā)開(kāi)辟了新的空間。也為大葉藻中黃酮結(jié)構(gòu)-功

10、能方面的研究提供了依據(jù)。
　　 文章最后進(jìn)行了大葉藻黃酮化合物粗提物的抗氧化活性實(shí)驗(yàn),主要是研究其對(duì)超氧陰離子的清除能力、對(duì)羥自由基的清除能力,以及對(duì)油脂的抗氧化酸敗等,大葉藻黃酮對(duì)羥自由基、超氧陰離子有較強(qiáng)的清除作用。當(dāng)添加濃度為10mg·mL-1時(shí),對(duì)羥自由基的清除作用最大可達(dá)91.56％;當(dāng)添加濃度為8mg·mL-1時(shí),對(duì)超氧陰離子的清除作用最大可達(dá)90.43％,說(shuō)明適宜的添加濃度,大葉藻黃酮可以完全清除了已產(chǎn)生的超氧陰離