miRNA-132在移植排斥過(guò)程中作用的體外研究.pdf

1、目的：體外研究移植排斥過(guò)程中miRNA-132表達(dá)的變化，以及相應(yīng)基因VEGF-A的表達(dá)，從而為有效調(diào)控移植排斥反應(yīng)提供參考。
　　方法：①培養(yǎng)小鼠血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞系(EOMA)，加入異系Balb/c小鼠脾分離的T淋巴細(xì)胞，構(gòu)建移植排斥反應(yīng)體外模擬實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分組包括EOMA組、EOMA+IL-2組、EOMA+IL-2+T淋巴細(xì)胞組。②分別在0、6、12、24小時(shí)收獲EOMA細(xì)胞，采用TaqMan miRNA Assays技術(shù)對(duì)各組m

2、iRNA-132的表達(dá)變化進(jìn)行相對(duì)定量研究。③并進(jìn)一步通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)VEGF-AmRNA的表達(dá)變化，通過(guò)免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)VEGF-A蛋白的表達(dá)及MTT比色法檢測(cè)EOMA細(xì)胞的增殖。
　　結(jié)果：①EOMA+IL-2+T淋巴細(xì)胞組miRNA-132表達(dá)水平在12小時(shí)和24小時(shí)較EOMA組、EOMA+IL-2組有顯著性差異(P<0.05)，組間兩兩比較EOMA+IL-2+T淋巴細(xì)胞組明顯高于EOMA組、EOMA+IL-

3、2組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而在0小時(shí)和6小時(shí)三組間miRNA-132表達(dá)水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。②EOMA+IL-2+T淋巴細(xì)胞組VEGF-AmRNA表達(dá)水平在12小時(shí)和24小時(shí)較EOMA組、EOMA+IL-2組有顯著性差異(P<0.05)，組間兩兩比較EOMA+IL-2+T淋巴細(xì)胞組明顯高于EOMA組、EOMA+IL-2組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而在0小時(shí)和6小時(shí)三組間VEGF-A mRNA表達(dá)水平

4、無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。③EOMA+IL-2+T淋巴細(xì)胞組VEGF-A蛋白表達(dá)在12小時(shí)和24小時(shí)較EOMA組、EOMA+IL-2組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而在0小時(shí)和6小時(shí)三組間VEGF-AmRNA表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。④EOMA+IL-2+T淋巴細(xì)胞組EOMA細(xì)胞增長(zhǎng)速度在12、24小時(shí)較其他兩組明顯加快，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，在0、6小時(shí)增長(zhǎng)速度與EOMA組、EOMA+IL-2相近