小鼠心臟移植排斥中Treg細胞miRNA表達譜分析.pdf

1、目的：
　　研究小鼠心臟移植排斥反應中CD4+CD25+Treg細胞miRNA表達譜的變化，尋找調控Treg細胞免疫抑制功能的特異性miRNA，為有效抑制移植排斥反應提供解決方案。
　　方法：
　　1.建立同種小鼠腹腔異位心臟移植模型。將實驗動物隨機分為2組，即同系移植組和異系移植組，每組15只。
　　2.磁珠分選移植術后5天受體脾臟CD4+CD25+Treg細胞，提取總 RNA，進行miRNA芯片雜交，使用Ag

2、ient G2505C Microarray Scanner進行圖像掃描，篩選出異系心臟移植排斥反應中 Treg細胞相對于同系移植組差異表達顯著的miRNA，與異種心臟移植miRNA表達譜進行交叉分析。
　　3.選取芯片雜交結果中差異表達顯著的miRNA-146a及miRNA-451a進行相對定量分析，通過qRT-PCR方法對兩組分選出的CD4+CD25+Treg細胞樣本進行檢測，驗證芯片結果。
　　4.通過 microRN

3、Aorg，TargetScan和 PITA軟件對兩組間差異表達顯著的miRNA-146a和 miRNA-451a進行相關靶基因預測，取三個數(shù)據(jù)庫共同的基因，后續(xù)分析miRNA調控Treg細胞影響移植排斥反應的調控通路。
　　結果：
　　1.模型訓練階段和成熟階段手術的成功率分別為32.5％和92.5%，成熟階段的手術成功率明顯高于前者。
　　2.磁珠分選小鼠脾臟CD4+CD25+Treg細胞的純度為89.3%。

4、　　3.異系移植組與同系移植組芯片雜交結果顯示移植術后受體小鼠脾臟CD4+CD25+Treg細胞中有58個miRNA表達顯著升高，12個miRNA表達顯著下降，共計70個miRNA差異表達顯著；與異種心臟移植供心miRNA表達譜進行交叉分析發(fā)現(xiàn)共有9個miRNA差異性表達一致。
　　4.對差異表達顯著的miRNA-146a與miRNA-451a進行定量分析，結果顯示異系移植組 miRNA-146a的表達量比同系移植組升高3.480

5、倍，異系移植組miRNA-451a的表達量比同系移植組降低2.618倍，而且miRNA變化幅度與芯片結果一致。
　　5.通過miRNA靶基因預測軟件預測出miRNA-146a與移植排斥反應相關的靶基因為TRAF6，IRAK1和 STAT1，miRNA-451a與移植排斥反應相關的靶基因為LKB1和AKT1。
　　結論：
　　1.表達譜分析結果表明同種異系心臟移植排斥反應中 Treg細胞有多個miRNA差異表達顯著，這些

6、 miRNA在細胞的分化、成熟以及細胞的凋亡等過程發(fā)揮了重要作用。
　　2.同種異系心臟移植Treg細胞miRNA表達譜與異種心臟移植供心miRNA表達譜交叉分析顯示共有9個miRNA差異性表達一致，說明這9個miRNA在移植排斥反應中發(fā)揮著重要的作用。
　　3.同種異系小鼠心臟移植排斥反應中Treg細胞內miRNA-146a出現(xiàn)顯著高表達，miRNA-451a出現(xiàn)顯著低表達，說明它們參與了 Treg細胞調控免疫應答及炎癥反