小鼠心臟移植排斥中Treg細(xì)胞miRNA表達(dá)譜分析.pdf

1、目的：
　　研究小鼠心臟移植排斥反應(yīng)中CD4+CD25+Treg細(xì)胞miRNA表達(dá)譜的變化，尋找調(diào)控Treg細(xì)胞免疫抑制功能的特異性miRNA，為有效抑制移植排斥反應(yīng)提供解決方案。
　　方法：
　　1.建立同種小鼠腹腔異位心臟移植模型。將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為2組，即同系移植組和異系移植組，每組15只。
　　2.磁珠分選移植術(shù)后5天受體脾臟CD4+CD25+Treg細(xì)胞，提取總 RNA，進(jìn)行miRNA芯片雜交，使用Ag

2、ient G2505C Microarray Scanner進(jìn)行圖像掃描，篩選出異系心臟移植排斥反應(yīng)中 Treg細(xì)胞相對(duì)于同系移植組差異表達(dá)顯著的miRNA，與異種心臟移植miRNA表達(dá)譜進(jìn)行交叉分析。
　　3.選取芯片雜交結(jié)果中差異表達(dá)顯著的miRNA-146a及miRNA-451a進(jìn)行相對(duì)定量分析，通過(guò)qRT-PCR方法對(duì)兩組分選出的CD4+CD25+Treg細(xì)胞樣本進(jìn)行檢測(cè)，驗(yàn)證芯片結(jié)果。
　　4.通過(guò) microRN

3、Aorg，TargetScan和 PITA軟件對(duì)兩組間差異表達(dá)顯著的miRNA-146a和 miRNA-451a進(jìn)行相關(guān)靶基因預(yù)測(cè)，取三個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)共同的基因，后續(xù)分析miRNA調(diào)控Treg細(xì)胞影響移植排斥反應(yīng)的調(diào)控通路。
　　結(jié)果：
　　1.模型訓(xùn)練階段和成熟階段手術(shù)的成功率分別為32.5％和92.5%，成熟階段的手術(shù)成功率明顯高于前者。
　　2.磁珠分選小鼠脾臟CD4+CD25+Treg細(xì)胞的純度為89.3%。

4、　　3.異系移植組與同系移植組芯片雜交結(jié)果顯示移植術(shù)后受體小鼠脾臟CD4+CD25+Treg細(xì)胞中有58個(gè)miRNA表達(dá)顯著升高，12個(gè)miRNA表達(dá)顯著下降，共計(jì)70個(gè)miRNA差異表達(dá)顯著；與異種心臟移植供心miRNA表達(dá)譜進(jìn)行交叉分析發(fā)現(xiàn)共有9個(gè)miRNA差異性表達(dá)一致。
　　4.對(duì)差異表達(dá)顯著的miRNA-146a與miRNA-451a進(jìn)行定量分析，結(jié)果顯示異系移植組 miRNA-146a的表達(dá)量比同系移植組升高3.480

5、倍，異系移植組miRNA-451a的表達(dá)量比同系移植組降低2.618倍，而且miRNA變化幅度與芯片結(jié)果一致。
　　5.通過(guò)miRNA靶基因預(yù)測(cè)軟件預(yù)測(cè)出miRNA-146a與移植排斥反應(yīng)相關(guān)的靶基因?yàn)門(mén)RAF6，IRAK1和 STAT1，miRNA-451a與移植排斥反應(yīng)相關(guān)的靶基因?yàn)長(zhǎng)KB1和AKT1。
　　結(jié)論：
　　1.表達(dá)譜分析結(jié)果表明同種異系心臟移植排斥反應(yīng)中 Treg細(xì)胞有多個(gè)miRNA差異表達(dá)顯著，這些

6、 miRNA在細(xì)胞的分化、成熟以及細(xì)胞的凋亡等過(guò)程發(fā)揮了重要作用。
　　2.同種異系心臟移植Treg細(xì)胞miRNA表達(dá)譜與異種心臟移植供心miRNA表達(dá)譜交叉分析顯示共有9個(gè)miRNA差異性表達(dá)一致，說(shuō)明這9個(gè)miRNA在移植排斥反應(yīng)中發(fā)揮著重要的作用。
　　3.同種異系小鼠心臟移植排斥反應(yīng)中Treg細(xì)胞內(nèi)miRNA-146a出現(xiàn)顯著高表達(dá)，miRNA-451a出現(xiàn)顯著低表達(dá)，說(shuō)明它們參與了 Treg細(xì)胞調(diào)控免疫應(yīng)答及炎癥反