miRNa-4530在乳腺癌血管形成過程中的功能研究.pdf

1、目的：
　　在前期的研究中，我們發(fā)現(xiàn)miR-4530在糖尿病伴視網(wǎng)膜病變的病人血清中上調(diào)，在線miRNA靶基因預(yù)測數(shù)據(jù)庫顯示miR-4530其中一個(gè)靶基因是VASH1，并且在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中進(jìn)行了初步的驗(yàn)證，確定了miR-4530具有促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞形成血管結(jié)構(gòu)的活性。在本研究中，我們的研究目的是探索是否miR-4530促進(jìn)血管形成的能力能否用于調(diào)控腫瘤血管的形成，從而在抑制腫瘤血管形成的治療方法上，提供一個(gè)新的靶點(diǎn)和思路。

2、　　方法：
　　1)我們通過給兩種乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231和MCF-7轉(zhuǎn)染miR-4530的干擾質(zhì)粒，構(gòu)建了穩(wěn)定干擾miR-4530的細(xì)胞株，包括高表達(dá)株、低表達(dá)株和空載對照細(xì)胞株。
　　2)測定干擾后細(xì)胞的各項(xiàng)細(xì)胞功能及相關(guān)的mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)。包括血管形成實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期和凋亡、克隆形成實(shí)驗(yàn)和VASH1的mRNA和蛋白水平表達(dá)量。
　　3)將穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的MDA-MB-231細(xì)胞株接種到2個(gè)月大的雌

3、性裸小鼠的皮下，并監(jiān)視成瘤情況及記錄成瘤體積。
　　結(jié)果：
　　1)通過熒光定量檢測轉(zhuǎn)染后的單克隆細(xì)胞株miR-4530的表達(dá)量，篩選出來了穩(wěn)定干擾的細(xì)胞株。
　　2)高表達(dá)miR-4530后，兩種乳腺癌細(xì)胞株均表現(xiàn)為增殖能力降低，凋亡比率增加，VASH1的mRNA和蛋白表達(dá)水平都明顯降低，但其成管能力明顯增強(qiáng);低表達(dá)miR-4530后，細(xì)胞增殖能力有所增強(qiáng)，凋亡減少，VASH1的mRNA與蛋白表達(dá)水平有一定的增加，但

4、其成管能力明顯被抑制。
　　3) MDA-MB-231細(xì)胞高表達(dá)miR-4530后，其生存能力降低，接種到雌性裸小鼠皮下后，成瘤率低，生長速度慢，瘤體小。低表達(dá)miR-4530后，早期生長速度與對照組并無差異，待瘤體積增大后，生長速度不及對照組，且不斷變慢。
　　結(jié)論
　　1)高表達(dá)miR-4530通過降低VASH1的表達(dá)，增強(qiáng)乳腺癌細(xì)胞透導(dǎo)血管形成的能力，但同時(shí)會(huì)抑制乳腺癌細(xì)胞本身的生長能力。低表達(dá)miR-4530能