mPRβ在豬卵母細(xì)胞體外成熟過(guò)程中的表達(dá)和作用的研究.pdf

1、孕激素膜受體(membrane progestin receptors，mPRs)，是最近發(fā)現(xiàn)的一個(gè)大的蛋白家族成員，包括α、β和γ三種亞型。以往研究顯示，它們?cè)诘偷燃棺祫?dòng)物卵母細(xì)胞成熟過(guò)程中起著重要的作用。但是，到現(xiàn)在為止，還沒(méi)有它們?cè)诓溉閯?dòng)物卵母細(xì)胞成熟過(guò)程中的表達(dá)和作用的相關(guān)研究。 為了檢測(cè)mPR β mRNA是否在豬卵母細(xì)胞一卵丘細(xì)胞復(fù)合體(oocyte-cumulus complexes，COCs)中表達(dá)，本實(shí)驗(yàn)利用G

2、eneBank上豬mPRβ的eDNA序列設(shè)計(jì)引物，擴(kuò)增出了一段1447bp序列，并將所得序列進(jìn)行了測(cè)序和BLAST比對(duì)。結(jié)果顯示，所測(cè)得的序列與GeneBank上cDNA序列的同一性為100％，說(shuō)明mPRβ mRNA在豬的COCs中有表達(dá)。隨后，用半定量RT-PCR，分析了豬COCs體外成熟過(guò)程中，0h，12h，20h，36h和44h五個(gè)時(shí)期mPR β mRNA的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，20h和36h mPR β mRNA的表達(dá)量顯著高于0

3、h(P(0.05)，其它各組間沒(méi)有顯著差異。在整個(gè)成熟過(guò)程中，mPRβ mRNA的表達(dá)呈先升高后降低的趨勢(shì)，并在20h達(dá)到峰值。為了研究促性腺激素對(duì)mPR β mRNA的表達(dá)是否有影響，將成熟培養(yǎng)液中的LH或FSH去除。結(jié)果顯示，去除培養(yǎng)液中的LH或FSH，對(duì)mPR β mRNA的表達(dá)沒(méi)有顯著的影響。 以上在轉(zhuǎn)錄水平上對(duì)mPR β在豬COCs中的表達(dá)進(jìn)行了分析。為了進(jìn)一步在翻譯水平上研究mPR β在豬COCs中表達(dá)的規(guī)律，利用m

4、PR β的一段多肽制備了抗體，進(jìn)行蛋白分析。Western blotting結(jié)果顯示，在0h沒(méi)有mPRβ表達(dá)，在20h有高的表達(dá)量，而在44h其表達(dá)量又降到很低水平。三個(gè)時(shí)期的表達(dá)量之間差異顯著(P<0.05)。免疫熒光分析顯示，mPR β至少部分定位在卵丘細(xì)胞的膜上。而在小鼠的胎兒成纖維細(xì)胞(mouse embryo fibroblasts，MEFs)中，mPR β主要定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上。在豬COCs的成熟培養(yǎng)液中添加10％的抗血清mPR