IRF3-EGFP為標(biāo)記的篩選抗病毒藥物細(xì)胞模型的建立.pdf

1、病毒感染宿主后，引發(fā)宿主的先天免疫和獲得性免疫反應(yīng)，可以有效終止病毒的入侵。作為抵御病毒第一道防線的先天免疫反應(yīng)，其中一個關(guān)鍵性步驟是合成并分泌Ⅰ型干擾素(IFN)。先天免疫系統(tǒng)中的細(xì)胞可以表達(dá)模式識別受體(PRR)來識別病毒在宿主體內(nèi)復(fù)制時產(chǎn)生的一些保守成分，即病原相關(guān)分子模式(PAMPs)。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了三種PRR——Toll樣受體(TLR)、NOD樣受體(NLRs)和維甲酸誘導(dǎo)的基因Ⅰ樣受體(RLRs)。其中TLR和RLR是識別病

2、毒PAMP并誘導(dǎo)產(chǎn)生Ⅰ型IFN的主要受體。
　　 干擾素調(diào)節(jié)因子3（IFN Regulatory Factor3，IRF3）是干擾素調(diào)節(jié)因子家族的一個重要成員，在誘導(dǎo)IFN產(chǎn)生過程中起著重要作用。它在多種細(xì)胞中呈現(xiàn)高水平表達(dá)狀態(tài)。它具有多個結(jié)構(gòu)域，其中，轉(zhuǎn)錄活化結(jié)構(gòu)域(TAD)的兩側(cè)是兩個可以相互作用的自身抑制結(jié)構(gòu)域(AID)。在IRF3未受到刺激時，AID彼此相互作用掩蓋TAD，防止IRF3移位至細(xì)胞核與核內(nèi)的DNA結(jié)合。IR

3、F3在非感染的細(xì)胞中存在于胞質(zhì)內(nèi)，并且不與其他蛋白結(jié)合，以單體非活化形式存在。一旦受到上游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，IRF3被磷酸化激活，分子內(nèi)部的AID被打開，形成二聚體后進(jìn)入細(xì)胞核，誘導(dǎo)Ⅰ型IFN的產(chǎn)生。
　　 本論文的研究中，建立了穩(wěn)定表達(dá)IRF3-EGFP的HeLa細(xì)胞系，帶有綠色熒光蛋白標(biāo)記的IRF3可以在熒光顯微鏡下指示IRF3的定位。
　　 選取合適的感染滴度和時間，以單純皰疹病毒(HSV)和水皰性口炎病毒(VSV)感染該