兩種多糖為載體的磁性納米粒的比較研究.pdf

1、本課題將當(dāng)歸多糖作為載體材料制備當(dāng)歸多糖磁性納米粒,并將其與目前市場(chǎng)上常用的兩種多糖包覆的磁性納米粒進(jìn)行體內(nèi)外性狀的比較研究,考察當(dāng)歸多糖作為磁性納米載體材料的可行性。本實(shí)驗(yàn)主要從五個(gè)方面進(jìn)行比較研究:制備方法、質(zhì)量控制、體外表征、體內(nèi)分布和載藥性能。
　　第一部分：三種多糖包覆的磁性納米粒的制備
　　以岷縣當(dāng)歸為原料,采用水提醇沉,氫氧化鈣去鞣質(zhì)的方法從當(dāng)歸根莖中提取當(dāng)歸多糖浸膏;采用苯酚-硫酸法測(cè)定當(dāng)歸多糖浸膏糖含量;采

2、用化學(xué)共沉淀法制備三種磁性納米粒;通過比較產(chǎn)品表觀性狀、水溶性、磁響應(yīng)性和粒徑分布,初步評(píng)估制備方法的可行性,選擇體外穩(wěn)定性較好的磁性納米粒作為參比試劑,進(jìn)行后續(xù)的比較研究;比較磁傾析法和動(dòng)態(tài)透析法兩種不同的純化方式,最終選用動(dòng)態(tài)透析法純化得到兩種精制磁性納米粒,分別命名為當(dāng)歸多糖磁性納米粒(Asp-Fe3O4)和葡聚糖磁性納米粒(Dex-Fe3O4);分別采用苯酚-硫酸法和鄰二氮菲法測(cè)定磁性納米粒的糖含量和鐵含量,以初步評(píng)估兩種磁性納

3、米粒外層多糖的包覆量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:當(dāng)歸多糖浸膏的糖含量為67.72％;當(dāng)歸多糖磁性納米粒和葡聚糖磁性納米粒具有良好的體外性狀,表現(xiàn)為水溶性良好,粒徑分布均勻,磁響應(yīng)性強(qiáng),殼聚糖磁性納米粒體外穩(wěn)定性較差,表現(xiàn)為水溶性差,體外易團(tuán)聚;當(dāng)歸多糖磁性納米粒的糖含量為16.13%,Fe3O4含量為68.90%,葡聚糖磁性納米粒的糖含量為39.80%,Fe3O4含量為49.50%。綜上所述,初步確定當(dāng)歸多糖可作為磁性納米粒的載體材料,成功制備當(dāng)歸

4、多糖磁性納米粒;葡聚糖磁性納米粒體外性質(zhì)穩(wěn)定可作為參比制劑,進(jìn)行后續(xù)的比較研究;殼聚糖磁性納米粒不適于作為本實(shí)驗(yàn)的參比制劑,進(jìn)行后續(xù)的比較研究。
　　第二部分：兩種多糖包覆的磁性納米粒的體外表征比較
　　采用第一部分確定的制備工藝合成當(dāng)歸多糖磁性納米粒和葡聚糖磁性納米粒,并對(duì)兩種磁性納米粒的理化性質(zhì)進(jìn)行考察,評(píng)價(jià)當(dāng)歸多糖磁性納米粒的體外表征。通過傅里葉紅外光譜儀確定多糖和磁核Fe3O4的連接狀況,通過X射線衍射儀分析磁性納米

5、粒的純度和晶型結(jié)構(gòu),通過透射電鏡和激光粒度分析儀觀察磁性納米粒的形態(tài)和粒徑分布,通過振動(dòng)樣品磁場(chǎng)計(jì)考察磁性納米粒的磁學(xué)性能。傅里葉紅外光譜圖顯示兩種多糖成功包覆于磁核Fe3O4表面,并與磁核表面的官能團(tuán)形成穩(wěn)定的化學(xué)鍵;X射線衍射圖譜顯示磁性納米粒的主要成分為Fe3O4晶體,晶體純度高;透射電鏡和激光粒度分析圖譜顯示兩種磁性納米粒均為橢球形,分散性良好,二者的平均水合粒徑分別為82.3nm和75.4nm;磁化曲線圖譜顯示兩種磁性納米粒均

6、具有超順磁性,二者的飽和磁化強(qiáng)度分別為21emu/g和22emu/g。通過比較兩種磁性納米粒的體外表征發(fā)現(xiàn):與Dex-Fe3O4相比較,當(dāng)歸多糖磁性納米粒體外表征性狀良好,適于進(jìn)行后續(xù)的體內(nèi)分布的比較研究。
　　第三部分：兩種多糖包覆的磁性納米粒的體內(nèi)靶向分布研究
　　通過比較兩種磁性納米粒在大鼠體內(nèi)的分布代謝情況,對(duì)二者的體內(nèi)穩(wěn)定性和分布行為進(jìn)行評(píng)價(jià)。以SD雄性大鼠為模型動(dòng)物,采用尾靜脈給藥方式,考察在未置磁鐵和外置磁鐵兩

7、種情況下磁性納米粒在大鼠體內(nèi)的鐵處置狀況。采用原子吸收光譜法,以臟器鐵為檢測(cè)指標(biāo),分析兩種磁性納米粒在大鼠心、肝、脾、肺和腎的含量變化;采用普魯士藍(lán)染色法,以鐵離子為檢測(cè)目標(biāo),考察兩種磁性納米粒在大鼠肝臟和腎臟的鐵離子分布狀況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:未置磁鐵時(shí),兩種磁性納米粒在體內(nèi)均具有良好的被動(dòng)靶向性,葡聚糖磁性納米粒被動(dòng)靶向于肝、脾和肺,當(dāng)歸多糖磁性納米粒被動(dòng)靶向于脾和肺;外置磁鐵時(shí),兩種磁性納米粒均能夠表現(xiàn)出良好的肝臟靶向性,即主動(dòng)靶向性

8、。通過比較兩種磁性納米粒的體內(nèi)靶向分布進(jìn)一步確證,當(dāng)歸多糖磁性納米粒體內(nèi)性狀穩(wěn)定,適于進(jìn)行載藥性能的比較研究。
　　第四部分：兩種磁性納米粒的載藥性能考察
　　采用反相微乳法,以5-FU為模型藥物,戊二醛為交聯(lián)劑,制備兩種載藥磁性納米粒,分別命名為載藥當(dāng)歸多糖磁性納米粒(5-FU-Asp-Fe3O4)和載藥葡聚糖磁性納米粒(5-FU-Dex-Fe3O4)。體外考察兩種載藥磁性納米粒的粒徑、載藥率、包封率、磁響應(yīng)性和釋藥特征,

9、比較兩種磁性納米粒的載藥性能。通過激光粒度分析儀評(píng)價(jià)載藥磁性納米粒的粒徑分布,通過紫外分光光度法檢測(cè)載藥磁性納米粒的載藥率和包封率,通過溶出度實(shí)驗(yàn)考察載藥磁性納米粒在PBS緩沖溶液的釋藥特征,通過沉降法比較兩種載藥磁性納米粒的磁響應(yīng)性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:5-FU-Asp-Fe3O4和5-FU-Dex-Fe3O4載藥后粒徑增大,約260nm,分散度明顯減小;5-FU-Asp-Fe3O4的載藥率為8.98%,包封率為39.30%;5-FU-De