多糖修飾的PLGA納米粒作為抗腫瘤藥物載體的研究.pdf

1、納米控釋系統(tǒng)作為新型的藥物載體，具有緩釋、靶向、提高生物利用度，減少副作用等特點(diǎn)。將載體材料制成不同粒徑的納米粒子與連接適當(dāng)配體作為抗腫瘤藥物載體的研究成為近年來(lái)國(guó)內(nèi)外一個(gè)極為重要的研究熱點(diǎn)。本研究制備了載表阿霉素(EPI)的納米粒，并合成了生物素化的殼聚糖(Bio—CS)，以此來(lái)修飾納米粒，增強(qiáng)與腫瘤細(xì)胞的相互作用，達(dá)到靶向抗腫瘤作用，增強(qiáng)藥物抗腫瘤效果。 ⑴選用W1/O/W2復(fù)乳法制備了載EPI的PLGA納米粒，采用兩種方法

2、用CS修飾PLGA納米粒表面：吸附的方法和共價(jià)交聯(lián)的方法。粒徑分析未修飾的PLGA納米粒平均粒徑為(248.4±21.0) nm，Zeta電勢(shì)為—(21.21±2.13) mV，掃描電鏡(SEM)及透射電鏡(TEM)下觀察其形態(tài)圓整，測(cè)定藥物包封率為(84.1±3.4)％。通過(guò)X射線光電子能譜(XPS)檢測(cè)到CS修飾后的納米粒表面含有氮元素信號(hào)；紅外光譜(FT—IR)證實(shí)了具有氨基特征峰，證明修飾后的納米粒表面為CS。兩種方式修飾后納米

3、粒表面電勢(shì)為正電荷，且粒徑、包封率及釋藥性質(zhì)發(fā)生了不同程度的改變，修飾后的納米粒藥物包封率下降，但藥物的釋放更加平緩且突釋降低，特別是共價(jià)交聯(lián)方法修飾的納米粒具有釋藥平緩的特點(diǎn)。 ⑵通過(guò)不同的投料比合成了三種不同取代度的Bio—CS，通過(guò)1HNMR以及光電子能譜(ICP)確定了Bio—CS取代度，以此通過(guò)共價(jià)交聯(lián)的方式修飾PLGA納米粒表面，考察了納米粒的表面電勢(shì)、粒徑、載藥量、包封率以及體外釋藥性質(zhì)等通過(guò)XPS以及生物素試劑盒

4、確定修飾后的納米粒表面生物素的量。選擇最優(yōu)取代度的Bio—CS來(lái)進(jìn)行下階段研究。體外抑瘤效應(yīng)選用Hela細(xì)胞，研究了空白納米粒載體的細(xì)胞毒效應(yīng)，載藥納米粒在4、24、48、72h時(shí)的抑瘤效應(yīng)，并考察了Hela細(xì)胞在不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)各種納米粒的吞噬能力。研究結(jié)果表明納米粒的載體材料在24h、48h的細(xì)胞活力均在90％以上，材料無(wú)明顯的細(xì)胞毒效應(yīng)；載藥納米粒特別是修飾后的納米粒在48h時(shí)表現(xiàn)出強(qiáng)的殺瘤效應(yīng)，連接了靶向配體生物素的納米粒殺瘤效應(yīng)更

5、強(qiáng)。熒光顯微鏡觀察細(xì)胞吞噬納米粒的能力，并且通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)定量檢測(cè)細(xì)胞的熒光強(qiáng)度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞吞噬納米粒的量增加，24h時(shí)未修飾的納米粒熒光強(qiáng)度最強(qiáng)，48h時(shí)Bio—CS修飾的納米粒組細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度最強(qiáng)，通過(guò)加入過(guò)量的生物素封閉細(xì)胞表面的生物素受體，可以觀察到Bio—CS修飾的納米粒進(jìn)入細(xì)胞的能力減弱。 ⑶通過(guò)小鼠體內(nèi)急性及亞急性毒性實(shí)驗(yàn)初步評(píng)價(jià)了納米粒的安全性，通過(guò)靜脈注射給藥，觀察記錄14d內(nèi)小鼠的狀態(tài)