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1、 目的:利用噬菌體隨機(jī)十二肽庫(kù)篩選出能夠和膠質(zhì)瘤細(xì)胞系SWO-38的兩株具有不同生物學(xué)特性克隆亞系Z1和Z2分別特異性結(jié)合的短肽序列,分析序列組成,找出能夠和膠質(zhì)瘤細(xì)胞特異性結(jié)合的配體蛋白質(zhì)及分析這些蛋白與細(xì)胞結(jié)合的氨基酸決定簇位點(diǎn)及方式,為研究短肽在腫瘤靶向藥物開發(fā)和腫瘤特異性定位標(biāo)志方面提供研究資料。
方法:用噬菌體隨機(jī)十二肽庫(kù)對(duì)體外培養(yǎng)的人膠質(zhì)瘤細(xì)胞Z1和Z2分別進(jìn)行5輪全細(xì)胞篩選。從每種細(xì)胞篩選后的兩部分噬菌體庫(kù)中,
2、即細(xì)胞表面結(jié)合部分和內(nèi)化入細(xì)胞部分,分別隨機(jī)挑選10個(gè)以上噬菌體單克隆進(jìn)行測(cè)序。同時(shí)對(duì)隨機(jī)挑選的噬菌體單克隆進(jìn)行與野生型VcsMl1噬菌體的競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)及對(duì)HepG-2、MCF-7、JEC、3T3、C2C12五種不同組織來(lái)源細(xì)胞系的特異性結(jié)合分析,利用免疫熒光方法檢測(cè)噬菌體克隆能否與細(xì)胞結(jié)合及結(jié)合部位。在測(cè)序結(jié)果中找出及分析出現(xiàn)頻率高的短肽序列和其可能的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。
結(jié)果:經(jīng)過(guò)5輪全細(xì)胞篩選后,各部分噬菌體庫(kù)的回收量均可達(dá)到1
3、0~7~10~8數(shù)量級(jí),且競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合分析及細(xì)胞特異性結(jié)合分析均顯示篩選后的噬菌體克隆及噬菌體庫(kù)對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞具有明顯的特異性緊密結(jié)合。測(cè)序結(jié)果顯示有三條序列出現(xiàn)頻率較高,其中序列-SLHSKAYERPLS-和-TITNANKPSITL-為兩株細(xì)胞所共有,而序列-STKVLPVHTRPA-為細(xì)胞Z1所獨(dú)有并只結(jié)合在Z1細(xì)胞表面。細(xì)胞免疫熒光可見(jiàn)具有展示短肽的噬菌體克隆可大量聚集結(jié)合在膠質(zhì)瘤細(xì)胞表面,并在細(xì)胞內(nèi)部呈現(xiàn)點(diǎn)簇狀聚集,發(fā)出綠色熒光。<
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