利用噬菌體展示技術(shù)篩選抗Aβ聚集的短肽.pdf

1、背景：隨著人口壽命的延長(zhǎng)和出生率的逐年降低，我國(guó)老齡化問(wèn)題日趨嚴(yán)重。老齡人群的高癡呆患病率已成為一個(gè)嚴(yán)峻的社會(huì)問(wèn)題。阿爾茨海默病(Alzheimer'sdisease，AD)是導(dǎo)致老年人癡呆的最常見(jiàn)原因。目前被批準(zhǔn)用于臨床治療AD的藥物寥寥無(wú)幾，僅有乙酰膽堿酯酶抑制劑如多奈哌齊和N-甲基-D-天冬氨酸鹽受體拮抗劑如美金剛，但這些藥物不能根本性逆轉(zhuǎn)AD病情，其治療仍處在對(duì)癥水平。目前較普遍認(rèn)同的假設(shè)是腦內(nèi)Aβ負(fù)荷增大是AD病理過(guò)程的啟動(dòng)因

2、子。因此，抗Aβ相互聚集形成寡聚體、纖絲和老年斑的物質(zhì)將可能最終成為逆轉(zhuǎn)AD患者病情的藥物。所以，研發(fā)抗Aβ相互聚集的藥物是未來(lái)的發(fā)展方向。 目的：以Aβ分子上包含影響Aβ分子相互聚集片段的Aβ1-10為靶分子，利用噬菌體肽庫(kù)展示技術(shù)篩選出與該特殊片段能特異性結(jié)合的短肽，在體外觀察其特異性結(jié)合Aβ、抑制Aβ自發(fā)形成纖絲的能力。 方法：合成包含有EFRH序列的Aβ1-10，并將其部分生物素化。以生物素化的Aβ1-10為

3、靶分子，用噬菌體展示技術(shù)及液相親和捕獲法篩選出特異性高親和力噬菌體。應(yīng)用BIAcore3000儀器檢測(cè)所篩得的噬菌體與靶分子之間的親和動(dòng)力學(xué)關(guān)系；透射電鏡下觀察特異性噬菌體能否阻止Aβ分子相互聚集形成斑塊；對(duì)特異性噬菌體隨機(jī)挑取單克隆，PCR擴(kuò)增后送測(cè)序公司測(cè)序；根據(jù)測(cè)序結(jié)果合成相應(yīng)的短肽，作進(jìn)一步的功能研究。 結(jié)果：經(jīng)過(guò)對(duì)靶分子的三輪篩選，篩出了與Aβ1-10特異結(jié)合的單克隆噬菌體；生物傳感分析技術(shù)結(jié)果進(jìn)一步表明靶分子(Aβ