β-葡聚糖促進(jìn)骨髓單核細(xì)胞分泌血管原性生長因子.pdf

1、目的：在β-葡聚糖作用下的骨髓單核細(xì)胞能夠促進(jìn)血管原性生長因子的分泌以及內(nèi)在的可能機(jī)制。 方法：從280克-320克六只雄性Lewis大鼠中提取脛骨及股骨的骨髓細(xì)胞，經(jīng)過一系列的密度梯度離心及白細(xì)胞裂解而得到骨髓單核細(xì)胞。以RPMI-1640和1％的胎兒牛血清作為培養(yǎng)基，向裝有骨髓單核細(xì)胞的24孔細(xì)胞培養(yǎng)板(1x10<'7>cells/well)中加入β-葡聚糖(10uag/ml、100ug/ml)或不加入β-葡聚糖，分別在正常

2、氧分壓(95％O<,2>/5％CO<,2>)和低氧分壓(1％O<,2>/5％CO<,2>)下，37℃溫箱內(nèi)孵育。孵育22個小時后，用不含血清的RPMI液進(jìn)行2次培養(yǎng)基上清液的清洗以去除非貼壁細(xì)胞，而貼壁細(xì)胞在RPMI-1640和1％的胎兒牛血清作為培養(yǎng)液的條件下，在正常氧分壓的溫箱內(nèi)繼續(xù)孵育48小時。用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的水平。以含有不同濃度上清的細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮

3、細(xì)胞，分析骨髓單核細(xì)胞培養(yǎng)上清對臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響。從培養(yǎng)的骨髓單核細(xì)胞中提取RNA進(jìn)行RT-PCR分析。 結(jié)果：ELISA結(jié)果顯示，正常氧分壓和低氧分壓時，無β-葡聚糖作用的骨髓單核細(xì)胞分泌的VEGF蛋白水平明顯低于低濃度β-葡聚糖組分泌的水平，兩者比較差異顯著；無β-葡聚糖作用的骨髓單核細(xì)胞在低氧分壓時分泌的VEGF蛋白水平明顯高于正常氧分壓時分泌的水平，兩者比較差異顯著；在本實驗所采用的β-葡聚糖濃度范圍內(nèi)，隨著β-

4、葡聚糖濃度的升高，VEGF蛋白分泌水平并不增高。RT-PCR分析表明，低氧分壓時，低濃度β-葡聚糖組VEGF mRNA表達(dá)水平明顯高于無β-葡聚糖組。MTT結(jié)果顯示，低氧分壓時，隨著骨髓單核細(xì)胞培養(yǎng)上清液濃度的增高，低濃度β-葡聚糖作用的骨髓單核細(xì)胞上清液和高濃度β-葡聚糖作用的骨髓單核細(xì)胞上清液MTT比色光密度值都增高，且分別高于無β-葡聚糖組，兩者比較差異顯著。 結(jié)論：首次研究了β-葡聚糖對骨髓單核細(xì)胞分泌血管原性生長因子的