血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合支架治療犬月骨缺血壞死.pdf

1、目的：觀察血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子基因(VEGF165)轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)支架復(fù)合物治療液氮冷凍犬月骨缺血壞死模型的效果，為臨床治療月骨無菌性缺血壞死(Kienb(o)ck 病)提供新方法。
　　 方法：抽取成年健康雜種犬的髂骨骨髓，體外分離純化并貼壁培養(yǎng)BMSCs。
　　 支架復(fù)合物構(gòu)建：a.接種于可吸收聚羥基乙酸(PGA)支架制備BMSCs-PGA 復(fù)合物；
　　 b.用脂質(zhì)體法將攜帶熒光蛋白VEGF1

2、65基因的穿梭質(zhì)粒轉(zhuǎn)入傳代培養(yǎng)后的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞中，接種于PGA 支架制備AdVEGF165-BMSCs-PGA 復(fù)合物；壞死月骨的造模：靜脈麻醉成功后，顯露犬月骨背側(cè)，用剝離破壞月骨周圍血供加液氮冷凍的方法造模，術(shù)后3W MRI 篩選出有早期月骨壞死征象模型犬12只；改良模型并行復(fù)合支架移植：再次麻醉并暴露月骨背側(cè)，開5×10mm 骨皮質(zhì)窗，盡可能多的剔除月骨內(nèi)壞死組織，騷刮后的空腔再次用液氮充填10min，然后移至室溫10min，凍

3、融過程重復(fù)3 次，最后將PGA，BMSCs-PGA和AdVEGF165-BMSCs-PGA分別移植進(jìn)壞死月骨的空腔中；分組：將月骨壞死改良模型12只犬按隨機(jī)數(shù)字表達(dá)法分為3組，轉(zhuǎn)染細(xì)胞移植組(移植AdVEGF165-BMSCs-PGA 復(fù)合物)，細(xì)胞移植組(移植BMSCs-PGA 復(fù)合物)和PGA 移植對(duì)照組，每組各4只；觀測(cè)：移植術(shù)后第4、8、12W分別對(duì)各組犬月骨行X線、CT、MRI 影像學(xué)及相關(guān)組織學(xué)和免疫組化檢測(cè)，觀察各組移植物

4、對(duì)壞死月骨改良模型的再血管化和骨修復(fù)能力。
　　 結(jié)果：對(duì)全部12只壞死月骨改良模型的觀測(cè)結(jié)果均進(jìn)行分析。移植術(shù)后12W轉(zhuǎn)染細(xì)胞移植組影像學(xué)和組織學(xué)評(píng)價(jià)壞死月骨修復(fù)情況均高于細(xì)胞移植組、對(duì)照組，差異具有顯著性意義(P＜0.01)。免疫組化染色結(jié)果表明，轉(zhuǎn)染細(xì)胞移植組可見壞死月骨血管化更明顯，對(duì)缺血壞死月骨修復(fù)能力優(yōu)于后兩者。
　　 結(jié)論：同種異體移植的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子基因轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)干細(xì)胞PGA 復(fù)合物(AdVEGF16