Rho激酶在慢性低氧高二氧化碳性肺動(dòng)脈高壓中的作用及法舒地爾干預(yù)機(jī)制的探討.pdf

1、目的：
　　 探討大鼠在慢性低氧高二氧化碳環(huán)境下,Rho激酶在慢性低氧高二氧化碳性肺動(dòng)高壓形成中的作用及法舒地爾干預(yù)作用及其機(jī)制的探討。
　　 方法：
　　 將SPF級(jí)雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠24只,體重(180～210g),隨機(jī)分成3組(n=8),即正常塒照組(N組)、低氧高二氧化碳4周+生理鹽水注射組(F組)、低氧高二氧化碳四周+法舒地爾干預(yù)組(R組)。將后兩組大鼠放入常壓低氧高二氧化碳艙

2、內(nèi),充入N2使艙內(nèi)氧氣濃度維持在9％～11％,二氧化碳濃度維持在5.0％～6.5％(艙內(nèi)水蒸汽用無水氯化鈣吸收),每天8小時(shí),每周6天,連續(xù)/l周。F組于每日進(jìn)艙前半小時(shí)腹腔注射生理鹽水0.5ml,R組于每日進(jìn)艙前半小時(shí)腹腔注射法舒地爾(15mg/kg),N組置于艙外,自由呼吸空氣,其他組飼養(yǎng)條件相同。實(shí)驗(yàn)4周后,大鼠用5％水合氯醛(400mg/Kg)腹腔注射麻醉,自頸外靜脈插管測(cè)肺動(dòng)脈壓(mPAP),頸總動(dòng)脈插管測(cè)平均頸動(dòng)脈壓(mCA

3、P)。分別稱取右心室游離壁(RV)和左心室加室間隔(LV+S)重量,以RV/(LV+S)％作為反映右心室肥大的指標(biāo)。HE染色測(cè)量肺細(xì)小動(dòng)脈管壁面積/管總面積(WA/TA)％,以mPAP、mCAP、RW(LV+S)％、(WA/TA)％作為判斷模型建立成功的指標(biāo)。光鏡下觀察肺血管重塑情況,電鏡下觀察肺細(xì)小動(dòng)脈超微結(jié)構(gòu)。ELISA法測(cè)定肺勻漿中NO及NOS的含量。免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)肺細(xì)小動(dòng)脈壁Rho激酶Ⅰ(ROCKI)及內(nèi)皮型一氧化氮合酶(

4、eNOS)蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 各組大鼠mCAP的比較:N組、F組、R組大鼠間mCAP無明顯差異,F組的mPAP明顯高于N組,R組mPAP顯著低于F組,F組的RV/(LV+S)高于N組,R組RV/(LV+S)顯著低于F組。F組的wA/TA高于N組,R組WA/TA顯著低于F組。(2)光鏡下所見:N組肺細(xì)小動(dòng)脈內(nèi)彈力板自然彎曲,平滑肌層未見明顯增厚,管壁均勻一致；F組細(xì)小動(dòng)脈內(nèi)彈力板扭曲明顯,中膜平滑肌層明顯增厚,

5、平滑肌細(xì)胞增生,管壁增厚；R組與F組相比較,平滑肌細(xì)胞肥大增生減輕,管壁增厚明顯減少。(3)電鏡下,F組與N組比較大鼠肺細(xì)小動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞吞飲小泡增多,血管壁增厚,中膜平滑肌細(xì)胞增生,纖維細(xì)胞增多,膠原纖維密集,管腔明顯狹窄,板層小體空泡狀,R組與F組相比平滑肌細(xì)胞肌絲清,色深,纖維細(xì)胞少,膠原纖維減少,肺泡上皮細(xì)胞連接緊密、微絨毛豐富、結(jié)構(gòu)清、板層小體染色深。(4)F組與N組比較肺勻漿中NO、NOS濃度顯著降低,R組與F組比較肺勻漿中N

6、O、NOS濃度顯著升高。(5)F組與N組比較肺細(xì)小動(dòng)脈ROCKI表達(dá)增強(qiáng),管壁染色明顯加深,eNOS表達(dá)減弱,管壁染色減弱。R組與F組比較ROCKI表達(dá)減弱,管壁染色變淡,eNOS表達(dá)增加,管壁染色明顯加深。
　　 結(jié)論：
　　 低氧可引起肺血管Rho激酶表達(dá)增加。Rho激酶可能通過促進(jìn)肺血管平滑肌收縮以及肺血管重構(gòu)的途徑參與低氧性肺動(dòng)脈高壓的發(fā)生。Rho激酶抑制劑法舒地爾可能通過上調(diào)eNOS表達(dá)至內(nèi)源性NO生成增多從而