CTGF在慢性低氧高二氧化碳性肺動(dòng)脈高壓形成中的作用及葛根素的干預(yù)效應(yīng).pdf

1、目的： 觀察結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)在慢性低氧高二氧化碳性肺動(dòng)脈高壓大鼠模型中的變化，并探討其在肺動(dòng)脈高壓發(fā)生、發(fā)展中的作用及葛根素的干預(yù)效應(yīng)。 方法： 將SPF級(jí)雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠40只(體重180～210g)，隨機(jī)分成4組(n=10)，即正常對(duì)照組(N組)、低氧高二氧化碳2周組(H2w組)、低氧高二氧化碳4周組(H4w組)、低氧高二氧化碳4周+葛根素干預(yù)組(H4w+G組)。將后三

2、組大鼠放入常壓低氧高二氧化碳艙內(nèi)，艙內(nèi)氧氣濃度維持在8.5％～11％，二氧化碳濃度維持在5.0％～6.5％(艙內(nèi)水蒸汽用無(wú)水氯化鈣吸收，多余二氧化碳用氫氧化鈉吸收)，每天8小時(shí)，每周6天。H4w+G組于每日進(jìn)艙前半小時(shí)腹腔注射葛根素(50 mg/kg)，N組置于艙外，自由呼吸空氣，其他組飼養(yǎng)條件相同。動(dòng)物飼養(yǎng)到規(guī)定時(shí)間后，行腹腔麻醉，采用右心導(dǎo)管法測(cè)量平均肺動(dòng)脈壓(mPAP)，頸總動(dòng)脈插管測(cè)量平均頸動(dòng)脈壓(mCAP)，分別稱取右心室游離

3、壁(RV)和左心室加室間隔(LV+S)重量；HE染色測(cè)量肺細(xì)小動(dòng)脈管壁面積/管總面積[(WA/TA)％]。以mPAP、mCAP、RV/(LV+S)％、(WA/TA)％作為判斷模型建立成功的指標(biāo)。以RV/(LV+S)％作為反映右心室肥大的指標(biāo)。免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)肺細(xì)小動(dòng)脈壁CTGF蛋白表達(dá)，逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)測(cè)定肺組織中TGF-β1 mRNA及CTGF mRNA的變化情況。 結(jié)果： ①H2w組大鼠mPA

4、P、RV/(LV+S)％及(WA/TA)％分別為(16.77±0.96)mm Hg、(30.19±0.95)％和(45.37±1.28)％，與N組[(10.56±0.63)mm Hg、(22.00±0.66)％和(28.30±0.87)％]相比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.01)：H4w組大鼠mPAP、Rv/LV+S)％及(WA/TA)％分別為(23.16±0.59)mm Hg、(36.04±0.65)％和(55.95±1.32)％

5、，分別與N組、H2w組相應(yīng)數(shù)值比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.01)。 ②各組大鼠肺細(xì)小動(dòng)脈顯微結(jié)構(gòu)的變化：光鏡下可見N組與細(xì)支氣管伴行的肺細(xì)小動(dòng)脈內(nèi)彈力板自然彎曲，平滑肌層未見明顯增厚，管壁均勻一致，隨著低氧高二氧化碳時(shí)間的延長(zhǎng)，H2w組、H4w組與細(xì)支氣管伴行的肺細(xì)小動(dòng)脈內(nèi)彈力板逐漸扭曲，中膜平滑肌層明顯增厚，平滑肌細(xì)胞增生，管壁厚薄不均，管腔呈偏心狀狹窄。③肺細(xì)小動(dòng)脈壁CTGF蛋白表達(dá)情況： N組呈弱陽(yáng)性表達(dá)(0.11

6、9±0.009)，H2w組上升至0.155±0.012，與N組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；H4w組進(jìn)一步升高至0.173±0.066，分別與N組、H2w組相比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.01)。④肺組織TGF-β1mRNA相對(duì)含量： N組呈基礎(chǔ)量表達(dá)，相對(duì)含量為0.28±0.05，H2w組上調(diào)至0.74±0.07，與N組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；H4w組進(jìn)一步升高，相對(duì)含量值為1.05±0.06，分別與N

7、組、H2w組相比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.01)。⑤肺組織CTGF mRNA相對(duì)含量：N組呈基礎(chǔ)量表達(dá)，相對(duì)含量為0.34±0.04，H2w組上調(diào)至0.65±0.05，與N組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；H4w組進(jìn)一步升高，相對(duì)含量值為1.10±0.07，分別與N組、H2w組相比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.01)。⑥H4w+G組mPAP、RV/(LV+S)％、(WA/TA)％、肺細(xì)小動(dòng)脈壁CTGF蛋白表達(dá)量、肺組

8、織TGF-β1 mRNA和CTGF mRNA相對(duì)含量分別為(18.13±0.68)mm Hg、(31.81±0.76)％、(51.60±1.17)％、0.156±0.058、0.89±0.09、0.80±0.04，與H4w組相應(yīng)數(shù)值比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.01)。⑦相關(guān)性分析：在各組低氧高二氧化碳性肺動(dòng)脈高壓大鼠中，肺細(xì)小動(dòng)脈壁CTGF表達(dá)量均與肺動(dòng)脈壓力、肺細(xì)小動(dòng)脈管壁面積比值、右心指數(shù)呈正相關(guān)(r分別為0.898、0.8