C型瞬時(shí)受體電位通道TRPC在低氧高二氧化碳肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖、凋亡中的作用.pdf

1、目的:
　　探討低氧高二氧化碳性肺動(dòng)脈高壓時(shí)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖和凋亡與TRPC1/4/6的關(guān)系。
　　方法:
　　1.SD雄性大鼠麻醉后分離其肺動(dòng)脈。膠原酶Ⅰ組織塊消化法取肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞，放于37℃含5％ CO2和21％O2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
　　2.采用平滑肌α-肌動(dòng)蛋白(smooth muscleα-actin，α-SMA)免疫熒光染色法用熒光顯微鏡鑒定PASMCs。
　　3.選用傳至4～6代且生長(zhǎng)狀

2、態(tài)良好的PASMCs，加入無(wú)血清DMEM饑餓24 h，隨機(jī)分為6組:常氧對(duì)照組(N)，低氧高二氧化碳組(H)，DMSO組(D)，TRPC1/4/6抑制劑SKF-96365組(S)，TRPC1/4激動(dòng)劑CPA組(C)，TRPC6激動(dòng)劑OAG組(O)。N組置于37℃常氧培養(yǎng)箱(21％O2，5％ CO2)中培養(yǎng)24 h，其余5組放于37℃三氣培養(yǎng)箱(5％O2，6％ CO2)培養(yǎng)24 h。
　　4.指標(biāo)檢測(cè):造模結(jié)束后，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈

3、式反應(yīng)(RT-PCR)和蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western blotting)分別檢測(cè)TRPC1，4，6 mRNA和蛋白的表達(dá);CCK-8法檢測(cè)各組細(xì)胞增殖情況;原位末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡指數(shù);Fura2-AM雙波長(zhǎng)法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度。
　　結(jié)果:
　　1.與N組相比，H組和D組PASMCs中TRPC1/4/6 mRNA和蛋白表達(dá)量明顯增高(P＜0.05)，PASMCs增殖增加（P＜0.05），凋亡減少（

4、P＜0.05），細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度增高(P＜0.05)。
　　2.較之H組，SKF-96365降低了TRPC1/4/6 mRNA和蛋白的表達(dá)（P＜0.05），抑制了PASMCs的增殖(P＜0.05)，并促進(jìn)其凋亡（P＜0.05），降低了胞內(nèi)鈣離子濃度（P＜0.05）。
　　3.與H組相比，CPA升高了TRPC1 mRNA和蛋白的表達(dá)(P＜0.05)，促進(jìn)了PSAMCs的增殖（P＜0.05），抑制了PASMCs的凋亡（P＜0.0

5、5），增加了細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度(P＜0.05)。但TRPC4 mRNA和蛋白的表達(dá)變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　4.與H組相比，OAG升高了TRPC6 mRNA和蛋白的表達(dá)（P＜0.05）;促進(jìn)了PSAMCs的增殖（P＞0.05），抑制了PASMCs的凋亡(P＜0.05)，增加了細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度（P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　低氧高二氧化碳時(shí)，PASMCs中TRPC1/4/6 mRNA和蛋白表達(dá)增加，細(xì)胞內(nèi)