逆轉(zhuǎn)HL-60-ADM細(xì)胞后超微弱發(fā)光與氧自由基水平的變化.pdf

1、惡性腫瘤是危害人類(lèi)的主要疾病。目前化療是治療惡性腫瘤的主要手段之一，然而化療過(guò)程中產(chǎn)生的多藥耐藥（Multidrugresistance,MDR）卻是造成化療中斷、導(dǎo)致治療失敗的主要因素。近年來(lái)已發(fā)現(xiàn)多種藥物可逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的耐藥性，可如何評(píng)價(jià)其逆轉(zhuǎn)效果，臨床上至今仍缺乏客觀的檢測(cè)指標(biāo)，而超微弱發(fā)光為解決這一問(wèn)題提供了新的可能。生物的超微弱發(fā)光現(xiàn)象（UltraweakPhotonEmission，UPE）是普遍存在于有機(jī)體內(nèi)的一種自發(fā)的化

2、學(xué)發(fā)光現(xiàn)象。其產(chǎn)生與機(jī)體的氧化代謝、光合作用、細(xì)胞的分裂與死亡以及生長(zhǎng)調(diào)節(jié)等作用密切相關(guān)。不同細(xì)胞或同種細(xì)胞的不同生理與病理狀態(tài)，其發(fā)光強(qiáng)度都存在著明顯的差別。
　　本實(shí)驗(yàn)使用環(huán)孢素A（CSA）作為逆轉(zhuǎn)劑，將耐阿霉素人急性早幼粒白血病細(xì)胞系HL-60/ADM的耐藥性逆轉(zhuǎn)后，研究其超微弱發(fā)光強(qiáng)度的變化以及細(xì)胞內(nèi)氧自由基水平變化的特點(diǎn)，從而為研究耐藥機(jī)制、評(píng)價(jià)逆轉(zhuǎn)效果及指導(dǎo)臨床實(shí)踐奠定基礎(chǔ)。
　　目的：探討CSA對(duì)HL-60/A

3、DM細(xì)胞的耐藥逆轉(zhuǎn)作用，并比較逆轉(zhuǎn)前后細(xì)胞超微弱發(fā)光強(qiáng)度以及細(xì)胞內(nèi)氧自由基水平的變化特點(diǎn)。
　　方法：
　　1.選擇CSA作為耐藥逆轉(zhuǎn)劑，分別采用MTT法、流式細(xì)胞術(shù)和免疫組化法評(píng)價(jià)CSA對(duì)HL-60/ADM細(xì)胞的毒性及逆轉(zhuǎn)效果；
　　2.用IFFM-D型流動(dòng)式化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè)逆轉(zhuǎn)后HL-60/ADM細(xì)胞的超微弱發(fā)光強(qiáng)度；
　　3.用化學(xué)比色法檢測(cè)逆轉(zhuǎn)前后HL-60/ADM細(xì)胞內(nèi)MDA、SOD以及GSH含量的變化。

4、
　　結(jié)果：
　　1.CSA的細(xì)胞毒性與逆轉(zhuǎn)效果評(píng)定：
　　⑴當(dāng)CSA濃度為0.5μg/mL以下時(shí)，即可明顯抑制HL-60/ADM細(xì)胞的生長(zhǎng)（p＜0.01），超過(guò)4μg/mL時(shí)抑制作用明顯增強(qiáng)（p＜0.01）；
　　⑵當(dāng)CSA濃度為0.5μg/mL時(shí)即出現(xiàn)逆轉(zhuǎn)效應(yīng)，隨著CSA劑量增加，逆轉(zhuǎn)作用逐漸增強(qiáng)（p＜0.01）；當(dāng)CSA劑量達(dá)8μg/mL及以上時(shí)對(duì)細(xì)胞存活產(chǎn)生明顯影響。
　?、橇魇郊?xì)胞儀：經(jīng)CSA逆轉(zhuǎn)

5、后HL-60/ADM的G2期細(xì)胞顯著增多，而S期細(xì)胞明顯減少（P<0.01）；且逆轉(zhuǎn)后細(xì)胞內(nèi)ADM濃度明顯高于逆轉(zhuǎn)前（P<0.01）；
　　⑷免疫組化結(jié)果顯示HL-60/ADM細(xì)胞膜上P-gp糖蛋白高表達(dá)，逆轉(zhuǎn)后其表達(dá)顯著下降；
　　2.HL-60/ADM細(xì)胞經(jīng)4μg/mLCSA作用72h后，其細(xì)胞超微弱發(fā)光強(qiáng)度較逆轉(zhuǎn)前降低（P＜0.01）；
　　3.經(jīng)CSA逆轉(zhuǎn)后的HL-60/ADM細(xì)胞內(nèi)SOD的活性顯著降低（p＜0

6、.01），MDA的含量則有所升高（p＜0.05），GSH的含量也明顯降低（p＜0.01）。
　　結(jié)論：
　　1.CSA能有效逆轉(zhuǎn)HL-60/ADM的耐藥性。本實(shí)驗(yàn)示CSA的最佳逆轉(zhuǎn)濃度為4μg/mL；
　　2.逆轉(zhuǎn)后HL-60/ADM細(xì)胞超微弱發(fā)光強(qiáng)度值顯著降低。其原因可能與細(xì)胞增殖速度減慢，DNA復(fù)制減少，細(xì)胞內(nèi)氧化代謝減弱等因素有關(guān)；
　　3.逆轉(zhuǎn)后HL-60/ADM細(xì)胞內(nèi)氧自由基的含量升高，抗氧化劑的活性明