大鼠全腦缺血再灌注損傷后調(diào)控基因Bcl-2、Bax的表達(dá)及與細(xì)胞凋亡的關(guān)系.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文大鼠全腦缺血再灌注損傷后調(diào)控基因Bcl2、Bax的表達(dá)及與細(xì)胞凋亡的關(guān)系姓名：白麗亞申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：兒科學(xué)指導(dǎo)教師：畢長柏于哩哩20050301中文摘要方法:1.動物與分組:選取健康成年雄性Wista:大鼠56只，體重在180220克，隨機(jī)分為假手術(shù)組、缺血15分鐘再灌注1小時、6小時、12小時、24小時、48小時、72小時組，每組8只。2.模型制作:采用大鼠四條血管阻斷方法(Pulsinelli4VO法

2、)制備大鼠全腦缺血再灌注模型。大鼠用10%水合氯醛(350mgkg)腹腔注射麻醉，電凝雙側(cè)錐動脈，次日夾閉兩側(cè)頸總動脈巧分鐘，恢復(fù)再灌注。假手術(shù)組不電凝雙側(cè)錐動脈，不夾閉兩側(cè)頸總動脈，其余處理與手術(shù)組相同。3.標(biāo)本制作:于再灌注時間點麻醉動物，迅速剪開胸腔暴露心臟，于心尖處剪一小口，插入軟管至主動脈，絲線結(jié)扎固定，剪開右心耳，快速向心臟推注肝素化生理鹽水，沖凈血液后，以40C4%多聚甲醛灌流30分鐘，斷頭取腦，由視交叉平面冠狀切取約4m

3、m組織塊，置4%多聚甲醛固定，脫水，透明，石蠟包埋。4.凋亡細(xì)胞觀察:采用TUNEL法觀察不同再灌注時間組海馬腦區(qū)細(xì)胞凋亡的變化。5.Bcl2及Bax蛋白表達(dá):采用免疫組化法觀察Bcl2及Bax蛋白表達(dá)水平的變化。6.數(shù)據(jù)收集:于400倍光鏡下計數(shù)海馬CAI區(qū)陽性細(xì)胞數(shù)及總細(xì)胞數(shù)，計算陽性細(xì)胞率(陽性細(xì)胞率=陽t細(xì)胞數(shù)總細(xì)胞數(shù)X100%)。每張切片計數(shù)4個不重疊視野，取平均值。7.統(tǒng)計學(xué)分析:數(shù)據(jù)均以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(xis)表示。采用SP